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(無題) 削除/引用 No.3545-3 - 2010/11/18 (木) 22:45:36 - み うーん。 その先生はちょっと横着ですね。 ってなこと言ったら誰かに怒られるかな・・。 どんなシステムでも良いと考えておられる訳ではないようですし、 素人が１から考えて的確な物を選択できるとは思えない。 その先生が帰って来られてから必要条件をしっかり挙げて一緒に選択された方が良いような・・・。 shRNAが良いのかmiRNAが良いのかなど現時点で投稿者さんには分からないでしょう。 ウイルスベクターが良いのか普通のプラスミドが良いのか？ あと誘導系ですか。その選択肢もTetとか色々あるでしょうし。 プラスミドの名前を例に挙げるくらいなら、既にある程度のプランはたっているはずですし、先生が自身で考えれば１日でプランは立つでしょう。 まあ、事前にプラスミドを販売している会社の試薬カタログを眺めておくと良いでしょう。

(無題) 削除/引用 No.3545-2 - 2010/11/18 (木) 18:57:06 - masa ネットで適当にキーワードを入れたり論文を読めば沢山でてくるとは思いますが、実験初めて間もないようですし、急ぎのご様子ですので。 Sigma,Invitrogen,TAKRA,その他生命関連の試薬を扱っているメーカーのHPにいくとRNAi関連商品のページがあると思いますのでそちらを見ると良いかと思います。研究室に来ている業者さんに頼めばパンフレットをいろいろ頂けると思います。 特定の遺伝子をターゲットにする配列が挿入済みのvectorもありますし、自分で設計してligationして作成するものもあります。 あとは一過性発現の何が問題なのかを把握されていますか？一過性の導入ではアッセイ期間が長いと抑制が持続しないのが問題となりますが、単にRNAiによる抑制効果が見られないということであればvectorに切り替えるよりはsiRNAの配列の見直しや、導入試薬の見直しの方が有効かと思います。 あと「ある条件によってRNAiが起こるような（いわゆるトランスジェニックのような）細胞にしたいと考えています。」というのは誘導発現系の事だと思います。トランスジェニックという単語はちょっと意味が違いますのでお気を付け下さい。

stable transfectionのベクター 削除/引用 No.3545-1 - 2010/11/18 (木) 18:17:18 - まりえ 現在、HeLa細胞を用いて、一過的（トランジェント）なトランスフェクションの実験を行っています。 RNAiを行っているのですが、一過的トランスフェクションの実験だとうまくいっておらず、安定した（ステイブル）トランスフェクションを行う細胞を作ろうということになりました。 そこで必要になるベクターを探しておくように。と言われたのですが、どこから探したらいいのかわからない状況です。 研究室でこのような実験をしている人もおらず、先生は学会に行ってしまい・・・ ある条件によってRNAiが起こるような（いわゆるトランスジェニックのような）細胞にしたいと考えています。 先生が一つ例にあげたプラスミドの名前にデルタ？だったかギリシャ文字の入ったものがありました。（立ち話で言われたのでメモが取れず・・・） なにかヒントになるようなことを御存じの方がいれば、教えていただけないでしょうか？ ベクターの検索の仕方や、多く扱っているメーカーの名前でも結構です！ よろしくお願いします！

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