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(無題) 削除/引用 No.3544-8 - 2010/12/03 (金) 15:46:56 - vitrist だったら培地ではなく、PBSで界面活性剤を溶解してみてはいかがでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3544-7 - 2010/11/26 (金) 15:19:30 - lilly FBSにはLDHが含まれているらしく、その培地だと本当の内部のlactate量を計測しているようには思えないのですが、いかがでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3544-6 - 2010/11/25 (木) 17:23:15 - vitrist 私は、普通のDMEM+10% FBS培地中で漏出させています。 別にPBSでも問題なくできると思います。

(無題) 削除/引用 No.3544-5 - 2010/11/24 (水) 11:51:01 - lilly なるほど。 最後にお聞きしたいのですが、TritonX-100を処理した際、ほかにbuffer類は使用したのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3544-4 - 2010/11/22 (月) 18:24:26 - vitrist lactate dehydrogenaseならば大丈夫です。 oxidaseは分かりません。

(無題) 削除/引用 No.3544-3 - 2010/11/22 (月) 12:03:07 - lilly 返答ありがとうございます 気になったことが１つあります。 TritonX-100は0.25%程度なら、膜だけ破壊し、タンパクの酵素活性等はのこしておけるものなのでしょうか？ 界面活性剤にはタンパクの相互作用を破壊する作用もあったと思うのですが・・・ 乳酸を含むlysateに対して、lactate oxidaseを処理する実験系なので、そのオキシダーゼの活性が失われないようなlysis bufferの条件にならないのです・・・

(無題) 削除/引用 No.3544-2 - 2010/11/18 (木) 17:49:06 - vitrist 細胞を界面活性剤で処理して漏出してきた乳酸を計ればいいんじゃないでしょうか？ Triton X-100を培地に0.25%程度加えれば、細胞膜は溶けると思います。 あらかじめDMSOでTritonを倍希釈しておけば、操作しやすいと思います。

細胞内乳酸量測定 削除/引用 No.3544-1 - 2010/11/18 (木) 17:11:05 - lilly 細胞内の乳酸を測定する系を探しています。 細胞の乳酸量も測れる、lactate oxidaseを使ったkitが存在しているのは把握しているのですが、 そのkitの参考文献には細胞内のlactateをはかっているものはなく血液や培地のものだけでした。 論文を検索しても、検索の仕方が悪いのか、内部の乳酸をこのkitで見ているは見つけられませんでした。 細胞内の乳酸を実際に検討する方法はあるのでしょうか？ また、あるとしたら、細胞の調整などをどのように行えばいいのでしょうか？ 実験初心者で、初めてサイトに投稿するので、質問がよくわからないかもしれま。せんが、わかる方、ぜひ回答お願いします・

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