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マウスB細胞の不死化方法 トピック削除
No.3524-TOPIC - 2010/11/15 (月) 18:26:51 - chicken
方法を調べても分からなかったので教えていただきたいです。

マウスの脾臓からB細胞を精製し、そのB細胞を不死化させて様々な実験に使用したいと考えています。
B細胞の機能を維持したまま不死化させるにはどのような方法があるのでしょうか??

宜しくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3524-13 - 2010/11/24 (水) 18:49:21 - MP

> ライセンスがないので読んでいませんが、IgG分泌能を維持したままマウスB細胞を不死化できる方法が書かれていそうです。
> http://www.jimmunol.org/content/149/5/1524.abstract

その論文によるとablがいいみたいですね、かなり効率は低いと書いてありますが。largeTとかBmi-1あたりを一緒にいれるとどうなんでしょうね。

(無題) 削除/引用
No.3524-12 - 2010/11/24 (水) 18:37:19 - ~
マウスでもいけると思っていました。

ライセンスがないので読んでいませんが、IgG分泌能を維持したままマウスB細胞を不死化できる方法が書かれていそうです。
http://www.jimmunol.org/content/149/5/1524.abstract

(無題) 削除/引用
No.3524-11 - 2010/11/24 (水) 18:20:42 - MP
EBVはマウスの細胞には感染できないはず。
何らかのoncogeneとlargeTあたりをレトロか何かで感染させれば、不死化しそうな気もしますが、難しいのでしょうね。

(無題) 削除/引用
No.3524-10 - 2010/11/24 (水) 17:43:56 - ~
EBVに対する反応がないのは何故でしょうか?
B細胞そのものを維持するのであれば、効率がいいと思いますけど。

>抗体産生能を維持したまま不死化させたいと考えています。
求める機能が本当にこれだけであれば、
そのB細胞から抗体遺伝子をクローニングし、不死化細胞に導入することでも、
求める機能を持った不死化細胞が得られます。

本当は抗体産生能以外の機能も欲しいというのであれば、
その機能はなんですか?

そうなのですが・・・ 削除/引用
No.3524-9 - 2010/11/24 (水) 15:08:01 - chicken
ここではあえて融合させない方法を考えていまして・・・

(無題) 削除/引用
No.3524-8 - 2010/11/22 (月) 21:29:05 - ami
ハイブリドーマで目的が達成されます。

(無題) 削除/引用
No.3524-7 - 2010/11/22 (月) 16:35:09 - yuu
抗体作製ならミエローマ細胞とfusionさせますが。

(無題) 削除/引用
No.3524-6 - 2010/11/22 (月) 16:26:33 - chicken
抗体産生能を維持したまま不死化させたいと考えています。

答えられない 削除/引用
No.3524-5 - 2010/11/15 (月) 21:54:30 - ami
維持させたいB細胞の機能は、具体的には何ですか?

(無題) 削除/引用
No.3524-4 - 2010/11/15 (月) 21:22:21 - Actias
細胞バンクに聞いてみれば?

http://www.brc.riken.jp/lab/cell/

http://www.jhsf.or.jp/bank/cell.html

(無題) 削除/引用
No.3524-3 - 2010/11/15 (月) 20:01:34 - ビスケット
マウスの場合はよく分からないですが、ヒトでよくやられる特定の抗原特異的なB細胞の不死化方法としては、まず末梢血などを目的のpeptideでpulseして、その末梢血中に占める特異的なBCRを持った細胞(line)を増やします。その後、EBウイルスなどを感染させて、不死化させることができます。

そういった細胞はLCLと言います。
マウスでもLCLが作れるかは分かりませんが、参考までに。

(無題) 削除/引用
No.3524-2 - 2010/11/15 (月) 18:53:59 - くそったれ
EB感染させりゃいいでしょ!!

マウスB細胞の不死化方法 削除/引用
No.3524-1 - 2010/11/15 (月) 18:26:51 - chicken
方法を調べても分からなかったので教えていただきたいです。

マウスの脾臓からB細胞を精製し、そのB細胞を不死化させて様々な実験に使用したいと考えています。
B細胞の機能を維持したまま不死化させるにはどのような方法があるのでしょうか??

宜しくお願いいたします。

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