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新生mRNAの回収方法
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No.3504-TOPIC - 2010/11/10 (水) 10:49:43 -
macchi
お世話になっています。
今度実験で、培養細胞(HeLaやHEK細胞)における
新生RNAについて調べなくてはならなくなりました。
しかし、調べてもなかなかいい手法が載っている論文が見当たりません。
何かいい手法、論文があったら教えてください。
よろしくお願いします
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ありがとうございます。
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No.3504-6 - 2010/12/22 (水) 15:31:18 - まっち
現在invitrogenのキットを検討中です。
うまくいったらまたスレッドにて報告します。
(無題)
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No.3504-5 - 2010/11/12 (金) 00:24:03 - in situ
新生RNAの何を調べたいのかにもよりますが、新生mRNAの生成量を調べたいのであれば、RIによるパルスラベルがもっとも古典的かと思います。
近年RIが敬遠されるため、non-RI(DIGとかビオチンとか)によるラベルも行われていると思います。
あかねさんが書かれているのもその一種ですね。
RIより若干感度は落ちそうな気もしますし、ラベルがついた核酸がバイアスなく取り込まれるのかという点に関しては不安がありますが、回収できるというのはいいですね。
(無題)
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No.3504-4 - 2010/11/11 (木) 22:38:21 -
Actias+
回収じゃなくって検出なら、エクソンイントロンのジャンクションでRT-PCTとかあるけど。
阻害剤でPolIIを止めて、RNA を回収する?
論文を読んだ気がするのだけど......
(無題)
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No.3504-3 - 2010/11/11 (木) 11:48:04 -
おお
nuclear run on assayとかの方法が参考になるかもしれません。
Click
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No.3504-2 - 2010/11/10 (水) 16:42:25 - あかね
invitrogenのClick chemistryで新生RNAを回収することができます。
Bitin Avidinのシステムです。
このkit興味があったのですが、使用したことはありません。
macchiさん、もしこのkitを購入するのであれば、使用感等をお聞かせできないですか?
新生mRNAの回収方法
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No.3504-1 - 2010/11/10 (水) 10:49:43 -
macchi
お世話になっています。
今度実験で、培養細胞(HeLaやHEK細胞)における
新生RNAについて調べなくてはならなくなりました。
しかし、調べてもなかなかいい手法が載っている論文が見当たりません。
何かいい手法、論文があったら教えてください。
よろしくお願いします
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