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Hisタグ特異的抗体 for WB
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No.3500-TOPIC - 2010/11/09 (火) 15:46:02 - His
みなさまのご意見お聞かせください。
現在、hisタグ抗体を購入予定です。
これまでMBLのrabbitポルクロ抗体を使用していました。
4000倍希釈でも十分WBに使用でき、その後、回収し、何度も使用しています。
その原液がなくなってしまいそうなため、購入を計画しておりますが、過去トピも拝見させていただきましたが、それほど多くの方の書き込みがなく、もう少しだけ情報がほしいなと考えまして、トピックを立てさせていただきました。
私が現在購入する上で一番に考えている事は、値段です。
みなさまはどのようなメーカーのものを使用されていらっしゃいますでしょうか?
値段も比較的安く、お気に入りのメーカーを教えてください。
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No.3500-32 - 2010/11/11 (木) 18:26:37 - A
http://www.biocompare.com/
日本での値段に必ずしも比例していないかもしれませんが上のサイトで
うまく条件を絞り込んで検索すればお探しのAnti-His Abに限らず様々な
抗体、酵素や蛋白質などどのメーカーがどんな製品を販売しているか
かなり簡単に調べられると思います。これで候補を絞り込んで日本での
販売元をメールで確認してサンプルを送ってもらって比べて見ては
如何ですか。
(無題)
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No.3500-31 - 2010/11/11 (木) 15:30:56 - かかくどっとこむ
話が込み入っててよくわかりませんが、私が使っているのは:
キアゲン Penta-His Antibody、77,500円
100ug粉末を1mLに溶かし1000xで使う、が取り説の指示。77,500円/L
100uL, 4000x希釈で40000円よりはちょっと安いですよ。マウスですけど。
(無題)
削除/引用
No.3500-30 - 2010/11/11 (木) 06:18:08 -
おお
あと抗体は安いから粗悪とも言いがたく、なかなか値段では判断できませんね。高くて最悪なのもあります(アプリケーションによって違うかもしれません)。
(無題)
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No.3500-29 - 2010/11/11 (木) 02:10:26 -
おお
6xHisの抗体はタグにたいするこうたいでもあまり需要がないかもしれません。
なのでこれという抗体をあげれるひとはすくないのではとおもいます。納得
いく抗体はあまりないと思っているひとがおおいのではと。。。
とくに高等生物でつかうとバックグランドだらけで、そちらがメインの人は
リコンビナントようにだけそれを使うのもというのがありますから。。。
あとバリデーションについてはc末特異的とかn末特異的とかいうのは
それぞれアフィニティーをつかってかいしゅうしているわけで、
ユニバーサルなものについては、そういうのがまざってそんざいしている
とおもっていいいかとおもいます(ポリクロなので)。なので抗体価、ポジコンでの確認は
してるとおもいますが、それ以上はしていないと思います。
日本でマイナーな会社というとおもいつかないですが、やはり出入りする業者、代理店は
把握しているはずなので聞いてサンプルをもらうとかがいいかもしれません。
日本の会社でないならコバンスのポリクロはつかえたとおもいます。マンマルのライセート
過剰発現ならバックをおさえるために10000倍くらいにして、特異的なばんどが
確認できました。それでも若干のバックがでます。バクテリアであればもっとましかと
おもいます。
くわえて、最近抗体を使わないような検出キットが出回っているようですが、
値段、ランニングコストはわかりません。興味があればしらべてみてはどうでしょうか。
(無題)
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No.3500-28 - 2010/11/11 (木) 01:47:03 - C
私たちは、そしておそらく他の人も、このようなときは、pubmedで抗his-tag抗体を使ってる論文を調べられる範囲でピックアップして、掲載データと自分の実験目的との関連性を吟味して、良さそうなものを絞り込んでメーカーを紙に書き出し、それをもとにネットで価格や納期をチェックします。(今はそういうの調べるのに便利なサイトがいろいろありますね。)あるいは代理店の方に伝えて調べてもらうほうが早いかもしれないです。それでととりあえず一番安いのをオーダー、という感じでやっています。1日か2日あれば済むことなので今週末にでも一度試みられてはいかがでしょう。そうした作業をした上でそれでも価格的に無理があるものしか見つからないと言う事ならば改めてここで助言を請うということではどうでしょうか。日常的な研究や勉強などもあると思うし、あまりこの問題にこだわってエネルギーを費やすのもどうかなと。
(無題)
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No.3500-27 - 2010/11/11 (木) 00:29:49 - ab
抗体全般に関して言えば、100 ulで4万円で、4000倍希釈で使用できて、しかも再利用できる抗体はなかなかないと思います。同じ値段でも、1000倍とか悪いときは100倍、よくても2000倍くらいではないでしょうか。もし自分が同じ立場であれば、この抗体を続けて購入します。
全ての試薬がそうですが、抗体の使用感というのは、ひとによってそれぞれで、誰かが上手くできていたとしても、自分の系では上手く行かないこともよくあります。それは、その人と全く同じ手法で再現することが難しいからです。WBの場合、転写膜やブロッキング剤、洗浄用バッファー、検出試薬が異なれば、結果も違いますよね?極論すれば、同じラボでも同じ結果を出せないということが、ここのフォーラムでよく質問されていると思います。
他の方の意見は、参考程度にはなりますが、金銭的に困っていて失敗したくない、という場合はこれまで上手くできている系を続けたほうが無難でしょう。
もし、どうしても抗体を変えたい場合は、それぞれのメーカーにサンプルを依頼することをお勧めします。特に国内メーカーで自社の抗体を販売したい場合は、喜んでサンプルを出してくれると思いますよ。
最後に、質問者の方の受け答えは少しトゲがあります。自分では気づいていないかもしれませんが。
(無題)
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No.3500-26 - 2010/11/10 (水) 23:23:53 - His
いえいえ私はそのような事は申し上げておりません。
非常に参考になるコメントもありますし、こういったトピは馬鹿にされるかな?と内心思いながら立てましたので想定の範囲内です。
>要するにあなたは
>40000円以下で、4000倍希釈以上で、数回以上使いまわせて、院生15人以上で使っても長く使えて、自分が実験をすることなく、良い抗体がほしいわけですね。
はい。まあそういった条件が合えばよいですね。
>さらに目的に適った抗体を示すコメントで無い限り、一部の煽りコメントはともかく、建設的なコメントにもすべて反論。抗体を教えてもらえないとみんなのせい。みなさんはみなさんの立場でコメントしてくれているのに、相手のことはお構いなし。自分のことをわかってくれていないと言って逆切れ。
逆切れはしてはおりませんし、冷静にコメントを書いています。
全て反論もしてはいませんよ、もう少し冷静になってください。
私はみなさまからのコメントを総合して感じたことは、
抗His抗体に関するトピはこれまでいくつも立てられてはいるけれども、そのトピ内でいくつものメーカーが取り上げられ、議論されてきてはいない。おそらくそれはまだまだこのforumの使用者の中で使用実績がある方がおられないのかな?ということです。
それだけです。
こういったトピックは馬鹿にされますしそれは想定していましたので、私は冷静にコメントしています。
大切な命を犠牲にしてまでも成功するか懐疑的であれば、底は意地を張って頑張る(?)ところではないでしょう。
みなさまも時間とお金を有効に運用してみてくださいね。
(無題)
削除/引用
No.3500-25 - 2010/11/10 (水) 22:44:21 - ????
それからウサギの命も犠牲にしなければなりません。
>
> あなたのご意見をぜひうかがいたいものですね。
ウサギの命って。じゃああなたが使用している今までの抗体はどうやって作られているのか、知らないのですが。
我々の研究は多くの実験動物の犠牲によって成り立っており、常にその犠牲に感謝すべきなのです。あなたはそれに全く関わっていないとでも。
牛肉を食べても、自分では牛を殺していないから、関係ないとしらを切って生きてきた、もしくは虫一匹の命でも大切にする菜食主義ですか。
(無題)
削除/引用
No.3500-24 - 2010/11/10 (水) 22:38:13 - ????
要するにあなたは
40000円以下で、4000倍希釈以上で、数回以上使いまわせて、院生15人以上で使っても長く使えて、自分が実験をすることなく、良い抗体がほしいわけですね。
さらに
目的に適った抗体を示すコメントで無い限り、一部の煽りコメントはともかく、建設的なコメントにもすべて反論。抗体を教えてもらえないとみんなのせい。みなさんはみなさんの立場でコメントしてくれているのに、相手のことはお構いなし。自分のことをわかってくれていないと言って逆切れ。
わかりました。
あなたは後輩に実験を教えても、その実験が失敗したら、すべてを後輩のせいにする、タイプの先輩大学院生ですね。自分が労力を惜しんで教えたのに、失敗するなんてって感じですか。
後輩たちに裏でなんていわれているか、知っていますか。
(無題)
削除/引用
No.3500-23 - 2010/11/10 (水) 22:22:25 - His
非常に浅はかな考えの方がおられますね。
じゃあお聞きしますが、それなりにバリデーションがされたpAbを40000円程度で自作できるのでしょうか?条件検討のための一式の免疫器具や、peptide、精製、それからウサギの命も犠牲にしなければなりません。
あなたのご意見をぜひうかがいたいものですね。
(無題)
削除/引用
No.3500-22 - 2010/11/10 (水) 22:18:16 - ami
>そういった労力も私はお金に相当するものと考えています。
>必ずしもコマーシャルなものを買わないことが、経済的に余裕のないlabがすべきことではないでしょう。
>
>私はお金の有効利用をしたいだけです。1000円でも安くlabの人員がそれを問題なく共有し合えればそれが一番です。
自作すれば40000円使えるじゃん・・・
(無題)
削除/引用
No.3500-21 - 2010/11/10 (水) 22:16:42 - His
一部の抗体は自作はしています。多くがモノクロです。
ただ、tagとなると、免疫原に何を使うか、ここがとても大事なところでしょう。
お金がないlabというのなら、買わずに作れやと仰りたいのですよね。
うちのlabがhisタグ融合タンパクを扱うのが私一人であれば、組替え体を作製し、それを免疫して作製すればよろしいでしょう。
ただ、私一人ではありません。個々に別々の蛋白を扱っております。
私の組替え体で作製したpAbが他のhis融合タンパクに使えるかと言われるとやってみなければわかりません。ただ、多くのcommercialなものは、C末、N末 taggedでも認識できます、、などとそれなりのバリデーションがされています。
お金がないから、買わずに自分で作ったらいかがですか?というコメントはいかがなものでしょう。
そのpAbが使えなければ、コマーシャルなものを買うか、またその人が組み替え体を作製し免疫しなければならないでしょう。
そういった労力も私はお金に相当するものと考えています。
必ずしもコマーシャルなものを買わないことが、経済的に余裕のないlabがすべきことではないでしょう。
私はお金の有効利用をしたいだけです。1000円でも安くlabの人員がそれを問題なく共有し合えればそれが一番です。
(無題)
削除/引用
No.3500-20 - 2010/11/10 (水) 22:01:30 - ????
>
> ちなみに、私のlabでは抗体は共有(院生約15-20名?)していますので、
本当にかなりの量の抗体が必要で、しかも1000円でも安くしたいのであれば自作したほうが長い目で見て、格段に安くなりますが。
お金が無いラボではないなりに、努力をしています。
(無題)
削除/引用
No.3500-19 - 2010/11/10 (水) 18:40:10 - His
GEさま
>「またですか?」は別として、皆さんは、Hisさんが使われている抗体を念頭に置きつつ、きちんと意見をおっしゃってくれていると思います。また、<価格の比較しか出来ない方>といいますが、一番最初の質問で価格が最重要であること言っていることや、1000円でも安いのがあれば考るというHisさんの意見を見れば、価格を比較するのは当たり前ではないでしょうか。
値段が安ければ粗悪品もでてきます。
それは当然のことです。値段の比較も調べれば分かりますと私はレス7で答えています。
加えて、レス7で私は品質に信頼があるのは当然の上で、と但し書きをしています。
なので、そういったレスのやりとりを「念頭に置いて」いただいていれば、値段だけの比較のコメントをする方はいらっしゃらないと当然に思っていましたので。
>本当に安くていいのを知りたいのであれば、業者さんに今使っている抗体よりも安い抗体(容量も考慮して)を教えてもらって、それらをここでリストアップして皆様に評価を聞けば、いいのではないでしょうか?
初めからそのようにすれば問題はありませんでしたね。
それは仰る通りだと思います。
ただHisタグというのもあって、比較的良く使われるタグですしこの閲覧される方の中でそのメーカーも多様性があるのかなと期待してトピを立てさせていただいたまでです。
現行で使用している物がキャンペーン対象のということでしたので、それを購入してみようかと思います。
(無題)
削除/引用
No.3500-18 - 2010/11/10 (水) 17:17:15 - GE
>>そのような場合に、また心ない方々が「またですか?」や、価格の比較でしか出来ない方や建設的な意見を仰らない方々が同じようなコメントをされないことを祈るばかりです。
「またですか?」は別として、皆さんは、Hisさんが使われている抗体を念頭に置きつつ、きちんと意見をおっしゃってくれていると思います。また、<価格の比較しか出来ない方>といいますが、一番最初の質問で価格が最重要であること言っていることや、1000円でも安いのがあれば考えるというHisさんの意見を見れば、価格を比較するのは当たり前ではないでしょうか。
本当に安くていいのを知りたいのであれば、業者さんに今使っている抗体よりも安い抗体(容量も考慮して)を教えてもらって、それらをここでリストアップして皆様に評価を聞けば、いいのではないでしょうか?もし、それでも返事が無ければ、リストアップした抗体は安いだけで使い勝手が良くないのだと思います。今使われている抗体を使い続けるのがベストではないでしょうか?
(無題)
削除/引用
No.3500-17 - 2010/11/10 (水) 16:46:39 - His
Neさま、みさま
キャンペーン中とはなんてタイミング
そうですね、ボスと相談してみます。
ちなみに、私のlabでは抗体は共有(院生約15-20名?)していますので、
>100マイクロリットル4万で4000倍希釈でも使用できるなら、
>実験は100回はできますね。
>再利用が数回できるなら数百回になります。
その数百回なんてのはすぐかもしれません。
なのでトピックを立てましたが、具体的な物は出てこずじまいなので、
マイナーなメーカーのものは使われていないんだなあという印象ですねえ。
また私のようにlabの経済状況が厳しい方が、同じようなトピを立てられるかもしれませんね。
そのような場合に、また心ない方々が「またですか?」や、価格の比較でしか出来ない方や建設的な意見を仰らない方々が同じようなコメントをされないことを祈るばかりです。
みなさまありがとうございました。
(無題)
削除/引用
No.3500-16 - 2010/11/10 (水) 10:37:24 - み
100マイクロリットル4万で4000倍希釈でも使用できるなら、
実験は100回はできますね。
再利用が数回できるなら数百回になります。
普通の実験スケールならこのように思うので、メチャ安です。
さて、Hisさんの実験スケールも同じ感じですか?
要するに1回の反応ボリュームが異常に多いとか問題あるなら反応方法を変える方が良いと思ったので。
(無題)
削除/引用
No.3500-15 - 2010/11/10 (水) 10:37:08 - Ne
MBLのtag抗体キャンペーン中みたいですよ。
今、買っとけばどうですか。
https://ruo.mbl.co.jp/news/campaign/tag2010.html
(無題)
削除/引用
No.3500-14 - 2010/11/10 (水) 10:12:43 - His
Abさま
>4000倍希釈でWBに使用できて、何回か再利用もできて、100 ulで4万円で、今のところ問題なく使用できているなら、それが一番ではないかと。
もし、何か問題があるのなら別ですが。
ポリクロだからロット差が気になるとか?
ポリクロだからというのはあります。
それに私には100 ulであの良品質で40000円というのが妥当な値段なのかは分かりません。
そこで比較をしたいなという事でトピックを立てました。
個人的には1000円でも安ければ買い替えを検討するほど厳しい財政状況でして。。
(無題)
削除/引用
No.3500-13 - 2010/11/10 (水) 10:10:13 - His
みなさまコメントありがとうございます。
40000円の間違いです。失礼しました。
というわけで、やはり具体的に候補が上がらないですよね。
どういった事でしょうか?もちろんマイナーなメーカーで購入を検討するほど経済的な問題がない方なんでしょう特に最初の方にコメントいただけた方達は。
私のlabではやはり40000円で100 ulというのは再利用ができたとしても厳しいです。
MBLより安くで品質がよいもの、というものは、過去トピックを見ても確信的なものはありません。
またですか?、とか、ほとんどのメーカーはそれよりい安いでしょ、と言われた方がどんなメーカーを使用しているか大変気になるところではありますが。
試供品等あればいただいて自分で確認するしかないですかねえ。。
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