Bio Technical フォーラム

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MEFへのトランスフェクション トピック削除
No.3494-TOPIC - 2010/11/08 (月) 16:14:36 - ami
大変お世話になっております、あまり還元できておらずすいません。

MEF(Mouse Embryonic Fibroblast)へのトランスフェクションで苦労しています。見た目的には、かなり状態のよいMEFが作れているのですが、トランスフェクションの効率が上がりません。具体的には、GFPを発現するプラスミドで、５％くらいの導入効率しかありません。できれば２０％くらい導入できたらいいな、と思っているのですが、よい方法がございましたら教えてください。

現在は、FuGENE6を使用しています。細胞密度、トランスフェクション試薬の量、DNAの量、導入時の培地は検討しました。NIH3T3細胞には２０％以上導入できています。基本的には、トランスフェクション試薬を変えてみないといけないなと思っているのですが、MEFへの導入効率が示されているものがなく、経験のある方のご意見を伺いたいです。

よろしくお願いします。
　
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(無題) 削除/引用
No.3494-3 - 2010/11/08 (月) 20:26:53 - PYK
InvitrogenのLipofectamine LTXでかなり入りましたよ。
（50~60%程度）

(無題) 削除/引用
No.3494-2 - 2010/11/08 (月) 19:40:23 - MP
takaraのXfectがいいみたいです。
http://akitacellbiol.seesaa.net/article/121388822.html

MEFへのトランスフェクション 削除/引用
No.3494-1 - 2010/11/08 (月) 16:14:36 - ami
大変お世話になっております、あまり還元できておらずすいません。

MEF(Mouse Embryonic Fibroblast)へのトランスフェクションで苦労しています。見た目的には、かなり状態のよいMEFが作れているのですが、トランスフェクションの効率が上がりません。具体的には、GFPを発現するプラスミドで、５％くらいの導入効率しかありません。できれば２０％くらい導入できたらいいな、と思っているのですが、よい方法がございましたら教えてください。

現在は、FuGENE6を使用しています。細胞密度、トランスフェクション試薬の量、DNAの量、導入時の培地は検討しました。NIH3T3細胞には２０％以上導入できています。基本的には、トランスフェクション試薬を変えてみないといけないなと思っているのですが、MEFへの導入効率が示されているものがなく、経験のある方のご意見を伺いたいです。

よろしくお願いします。
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