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Tyrosine Hydroxylaseの免疫組織化学
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No.3480-TOPIC - 2010/11/05 (金) 21:43:58 -
まっくす
こんにちは。
神経の研究をはじめたばかりの者です。
神経節内で交感神経を染色するためにTyrosine Hydroxylaseの染色を行いたいのですが、よい抗体、染色方法はありますでしょうか?
さらに活性化を見るのにFosを用いることを考えております。神経節で免疫組織化学染色を行っている方や、なにかご存知の方、情報をいただけるとありがたいです。
どうぞよろしくお願いいたします。
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No.3480-5 - 2010/11/08 (月) 12:24:31 -
まっくす
taniさん
詳しく教えて頂きありがとうございます。
taniさんのおっしゃる通り同じ種であってもそのような染め分けができることに気づかせていただきました。
まずは、免染できることをしっかり確かめようと思います。
本当にありがとうございました。
(無題)
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No.3480-4 - 2010/11/08 (月) 02:33:57 - tani
ミリポアの抗体の中でもこれがよいというものはありますでしょうか?
ボクが使っているのは、カタログ番号 : AB152 のラビット抗体です、
http://www.millipore.com/catalogue/item/ab152
MAB318 については使用経験がありませんのでなんともお答えしようがありません、すいません。
ただ、免疫動物がマウスでもウサギでも交差性の範囲の広い抗体なので、二重染色で免疫動物が違うならいいが同じならだめだ、と理屈どうりみたいなことが言い切れるかどうかわかりません。
たとえば TH の発色をHRPにして、cFos をアルカリフォスファターゼにしてみるとかでも同じ免疫動物の抗体でも二重染色は簡単に可能です。
まずは、THや cFos なりの免疫染色がちゃんとできることをご確認下さい。同じ末梢神経束の中に交感神経が染まって、副交感神経がバックグラウンド として染まってくる前に発色を停止する、その見極めを誤らないことが重要です。
(無題)
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No.3480-3 - 2010/11/07 (日) 19:19:43 -
まっくす
taniさん
丁寧なご説明ありがとうございます。
ミリポアの抗体を試してみようと思います。
ひとつだけお聞きしたいのですが、ミリポアの抗体の中でもこれがよいというものはありますでしょうか?
私が染色したい組織がマウスなのですが、cFosとの二重染色を行うためにrabbitの抗体以外を選択したいと考えております。ミリポアの抗体の中でMAB318 clone:LNC1という抗体は使用できますでしょうか?
よろしくお願いいたします。
(無題)
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No.3480-2 - 2010/11/07 (日) 02:04:36 - tani
Tyrosine Hydroxylase(TH)は MILLIPOER 社の抗体がよい結果を出してくれています。
染色方法ですが、一次抗体の希釈は100倍で反応時間は一時間。
二次抗体はニチレイの MAX-PO Multi を使っています、反応時間は20分です。
発色はニチレイのDABです。内因性の除去はH2O2加メタノール10分、ブロックエース10分とふつう通りです。但し、賦活化処理はしないで下さい。
必ず末梢神経が入っている組織をコントロールにしてください。
Tyrosine Hydroxylaseの免疫組織化学
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No.3480-1 - 2010/11/05 (金) 21:43:58 -
まっくす
こんにちは。
神経の研究をはじめたばかりの者です。
神経節内で交感神経を染色するためにTyrosine Hydroxylaseの染色を行いたいのですが、よい抗体、染色方法はありますでしょうか?
さらに活性化を見るのにFosを用いることを考えております。神経節で免疫組織化学染色を行っている方や、なにかご存知の方、情報をいただけるとありがたいです。
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