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(無題) 削除/引用 No.3454-3 - 2010/11/02 (火) 17:56:26 - cdb ふぁ様 コメントありがとうございました。 参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.3454-2 - 2010/11/01 (月) 18:51:04 - ふぁ IRESの発言量を増強する方法の一例です。 http://www.plosbiology.org/article/info:doi%2F10.1371%2Fjournal.pbio.1000379

EMCVリボソーム内部侵入配列(IRES)1からIRES2への変換 削除/引用 No.3454-1 - 2010/11/01 (月) 16:17:48 - cdb お世話になっております。 現在、市販の-MCS-IRES1-薬剤耐性-というベクター(pIRES-bleo3)をもとに、 5'arm-GFP-IRES-薬剤耐性-3'armというTargeting Vectorを調製し、 蛍光観察と抗生物質による選抜が可能なknock-in細胞の樹立を目指しています。 調べたところ、元VectorはIRES1を用い薬剤耐性遺伝子をIRESから離すことによって 意図的に薬剤耐性遺伝子の発現量を落としているようです。 そこで、IRES1をIRES2へと変換し、耐性遺伝子前のスペーサーを除くことで 発現量の回復を目指しています。 同じメーカーから出ているIRES2のベクターと 元ベクターのIRES1を比較したところ、600bp弱のIRES配列の最後付近の IRES2のATGが、IRES1ではCTTへと変更されていました。 この部位を訂正するだけでIRES1がIRES2になるものなのでしょうか？ 平行して2Aの使用も考えておりますが、IRESの発現量改善法を ご存知の方は教えていただきますようお願い致します。

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