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ELISAでのIL-1β検出 トピック削除
No.3381-TOPIC - 2010/10/19 (火) 18:51:30 - 週末農民
マウス由来のBMMφやチオグリコレート誘導腹腔Mφを in vitroで刺激して、IL-1βの産生をELISAで見たいと思っています。

予備実験を一度やってみたのですが、当然というかCaspase-1が活性化されていないので、IL-1βは検出限界以下でした。

少し調べてみたら、回収の2時間前くらいにATP 5mM程度を加えると、ELISAでも結構IL-1βが検出されるようになった文献を見つけました。

こうした系(ATP後入れ)って、専門誌でも比較的すんなりと受け入れられるものなのでしょうか?

それと予備実験での判別が今一うまくいっていないのですが、他の炎症性サイトカイン(IL-1ファミリー以外、例えばIL-6やTNF-α)産生にATPの添加は影響するのでしょうか?
 
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No.3381-4 - 2010/10/21 (木) 14:10:54 - え
LPSとimiquimodならATPを入れないとIL-1bは成熟型にならないのは論文の通りではないでしょうか。ただ、Caspase-1の活性化と分泌は分けて考えたほうが良くて、IL-1bはプロのままでも分泌されます。
すんなりと受け入れられるものなのかというのは、どのことなのかわからないのですが。

(無題) 削除/引用
No.3381-3 - 2010/10/20 (水) 11:35:56 - 週末農民
えさま、お返事を頂きありがとうございます。

説明が不足しており申し訳ございません。

刺激物質として添加したのはLPSとImuquimod、一番応答をみたいのは
ウイルスのVSVなのですが、これでよろしいでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.3381-2 - 2010/10/20 (水) 11:18:39 - え
まず何で刺激したか書かないとわかりません。

ELISAでのIL-1β検出 削除/引用
No.3381-1 - 2010/10/19 (火) 18:51:30 - 週末農民
マウス由来のBMMφやチオグリコレート誘導腹腔Mφを in vitroで刺激して、IL-1βの産生をELISAで見たいと思っています。

予備実験を一度やってみたのですが、当然というかCaspase-1が活性化されていないので、IL-1βは検出限界以下でした。

少し調べてみたら、回収の2時間前くらいにATP 5mM程度を加えると、ELISAでも結構IL-1βが検出されるようになった文献を見つけました。

こうした系(ATP後入れ)って、専門誌でも比較的すんなりと受け入れられるものなのでしょうか?

それと予備実験での判別が今一うまくいっていないのですが、他の炎症性サイトカイン(IL-1ファミリー以外、例えばIL-6やTNF-α)産生にATPの添加は影響するのでしょうか?

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