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テトラサイクリン vs ドキシサイクリン トピック削除
No.3295-TOPIC - 2010/10/03 (日) 19:47:06 - 煮玉子
いま、テトラサイクリンで誘導するシステムを用いてターゲット遺伝子のノックダウンを試みています。(shRNA、Lentivirus)

しかし、テトラサイクリンを8μg/mL、96時間まで見たのですがなかなかターゲットのノックダウンが確認できません

質問は、テトラサイクリンで誘導するシステムでは、ドキシサイクリンの方が良いのでしょうか? TetよりDoxの方が100倍感度が良いと聞きましたが、これはTetとDoxの半減期に関係しているんでしょうか?  Medium changeはどのくらいの頻度で行えばよいですか?

アドバイスよろしくお願いします。
 
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No.3295-5 - 2010/10/22 (金) 07:36:12 - qq
invitrogenのTetRなら、Tetracycline(1ug/ml)でしょう。

(無題) 削除/引用
No.3295-4 - 2010/10/21 (木) 22:58:30 - masa
培地中での半減期についてはマニュアルに記載してあると思います。テトラサイクリンが12hでドキシサイクリンが24h位だったような・・・・

半減期から、機能する濃度点を逆算すれば、添加後の時間の問題は解決すると思います。

トランジェントな発現系は機能したのに、stableにすると機能しなくなるのは結構経験があります。

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No.3295-3 - 2010/10/21 (木) 21:53:28 - TMD
俺はTet-onシステム使って発現誘導行ってるんだけど、Doxの方がいいんじゃない?
tetシステム使ってる論文はほとんどDox使ってるよ。

(無題) 削除/引用
No.3295-2 - 2010/10/05 (火) 08:29:44 - Actias
shRNAは効果があるのか?

shRNAは発現しているのか?

テトラサイクリン vs ドキシサイクリン
を疑う以前に疑うべきことは、すべて「疑いなし」なのか?

テトラサイクリン vs ドキシサイクリン 削除/引用
No.3295-1 - 2010/10/03 (日) 19:47:06 - 煮玉子
いま、テトラサイクリンで誘導するシステムを用いてターゲット遺伝子のノックダウンを試みています。(shRNA、Lentivirus)

しかし、テトラサイクリンを8μg/mL、96時間まで見たのですがなかなかターゲットのノックダウンが確認できません

質問は、テトラサイクリンで誘導するシステムでは、ドキシサイクリンの方が良いのでしょうか? TetよりDoxの方が100倍感度が良いと聞きましたが、これはTetとDoxの半減期に関係しているんでしょうか?  Medium changeはどのくらいの頻度で行えばよいですか?

アドバイスよろしくお願いします。

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