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大腸菌の遠心 トピック削除
No.3294-TOPIC - 2010/10/03 (日) 11:37:05 - あらにん
大腸菌でタンパク質を発現させています。

大腸菌を3,000×gで15分遠心分離し、リゾチームで可溶化した後、12.000×gで30分遠心分離しようと思うのですが、遠心時間や遠心の強さはこの程度で十分でしょうか?培地は500ml×2本です。

論文を見てみますと、結構遠心の強さや時間が異なっていて、どの程度がいいのか迷っています。

回収の遠心:遠心が強かったり長いとバッファーで溶かすのに時間がかかる

可溶化後の遠心:遠心が強く長いほど余計なものが沈殿する。


と思っています。遠心が強かったり、遠心時間が長いことによる悪影響とかってありますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.3294-2 - 2010/10/03 (日) 12:21:30 - おお
えっとなにがしたいの?

必要なものが落ちてくるならそれ以上の遠心力はいりませんけど。

発現したものがインクルージョンぼでぃーにくるのを回収してるんでしょうか。それならお示しの条件はそんなにわるくないと思います。
沈殿が固すぎるのがいやなら、もっと弱くしてもいいでしょうけど、それは個々のケースで何処までできるか違うかもしれません。
一度条件を検討するしかないんではないでしょうか?

大腸菌の遠心 削除/引用
No.3294-1 - 2010/10/03 (日) 11:37:05 - あらにん
大腸菌でタンパク質を発現させています。

大腸菌を3,000×gで15分遠心分離し、リゾチームで可溶化した後、12.000×gで30分遠心分離しようと思うのですが、遠心時間や遠心の強さはこの程度で十分でしょうか?培地は500ml×2本です。

論文を見てみますと、結構遠心の強さや時間が異なっていて、どの程度がいいのか迷っています。

回収の遠心:遠心が強かったり長いとバッファーで溶かすのに時間がかかる

可溶化後の遠心:遠心が強く長いほど余計なものが沈殿する。


と思っています。遠心が強かったり、遠心時間が長いことによる悪影響とかってありますか?

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