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大腸菌の遠心
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No.3294-TOPIC - 2010/10/03 (日) 11:37:05 - あらにん
大腸菌でタンパク質を発現させています。
大腸菌を3,000×gで15分遠心分離し、リゾチームで可溶化した後、12.000×gで30分遠心分離しようと思うのですが、遠心時間や遠心の強さはこの程度で十分でしょうか?培地は500ml×2本です。
論文を見てみますと、結構遠心の強さや時間が異なっていて、どの程度がいいのか迷っています。
回収の遠心:遠心が強かったり長いとバッファーで溶かすのに時間がかかる
可溶化後の遠心:遠心が強く長いほど余計なものが沈殿する。
と思っています。遠心が強かったり、遠心時間が長いことによる悪影響とかってありますか?
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No.3294-2 - 2010/10/03 (日) 12:21:30 -
おお
えっとなにがしたいの?
必要なものが落ちてくるならそれ以上の遠心力はいりませんけど。
発現したものがインクルージョンぼでぃーにくるのを回収してるんでしょうか。それならお示しの条件はそんなにわるくないと思います。
沈殿が固すぎるのがいやなら、もっと弱くしてもいいでしょうけど、それは個々のケースで何処までできるか違うかもしれません。
一度条件を検討するしかないんではないでしょうか?
大腸菌の遠心
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No.3294-1 - 2010/10/03 (日) 11:37:05 - あらにん
大腸菌でタンパク質を発現させています。
大腸菌を3,000×gで15分遠心分離し、リゾチームで可溶化した後、12.000×gで30分遠心分離しようと思うのですが、遠心時間や遠心の強さはこの程度で十分でしょうか?培地は500ml×2本です。
論文を見てみますと、結構遠心の強さや時間が異なっていて、どの程度がいいのか迷っています。
回収の遠心:遠心が強かったり長いとバッファーで溶かすのに時間がかかる
可溶化後の遠心:遠心が強く長いほど余計なものが沈殿する。
と思っています。遠心が強かったり、遠心時間が長いことによる悪影響とかってありますか?
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