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(無題) 削除/引用 No.3291-13 - 2010/11/19 (金) 20:30:14 - まうす 交配を続けてわかったのですが、あるflox♂からだけモザイクが生まれることがわかりました。そのflox♂はどのrosa.cre♀と掛け合わせてもCre-の子供はモザイクになり、floxの子供は生まれてきません。特定のflox♂だけで起こり、兄弟のflox♂では起こりません。。これは個体差（精子の？）ということなのでしょうか。。。

(無題) 削除/引用 No.3291-12 - 2010/10/08 (金) 21:35:36 - TK-1 基本的なことですが、ROSA26 locusの発現はubiquitousですが、発現レベルとしてはそれほど高くないという印象を持っていますし、細胞系列や発生段階によって発現レベルは結構変わります。世間ではROSA26は高発現という印象がもたれているようですが、Creを含めいろんなノックインを使ってきた経験からはCAGなんかに比べてはかなり弱いですし、random integrationのtg mouseに比べて、single copyのノックインですから、弱いのは当然かもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3291-11 - 2010/10/08 (金) 09:02:01 - まうす Cre-negでfloxが組換わった仔は、いずれもwt/loxp/koのモザイクで、Rosa.creのマターナルトランスミッションはCAG.creに比べて弱いのかなと思っています。 テールクリップのコンタミを心配していたのですが、教えてもらえて助かりました。

(無題) 削除/引用 No.3291-10 - 2010/10/08 (金) 00:19:52 - ポスドクT おっしゃる通り、場合によってはflox/KOのキメラマウスが出現する可能性はあるかもしれません。floxが全ての細胞において抜けているか否かに関しては、Creを発現することで初めてGFPを発現するマウスなどを使用しないと証明しようがないと思います。 自分はCAG-Creを使用し始めてから2年になりますが、 CAG-Cre遺伝子なし（卵の細胞質のCreのみ）でfloxを抜いたマウスの子孫においてfloxが復活してしまったという経験はありません。 ですので、少なくとも生殖細胞系列では全てのfloxは抜けているのではないでしょうか。 あとRosa-CreはCre+の仔が1:1に生まれないとのことですが、 CAG-Cre（B6 Back）ではだいたい1:1で生まれてきます。 ただし、下のリンクにもあるようにCreの細胞毒性の可能性が示唆されていますので、発現パターンによってはCre＋が生まれにくくなるような現象はあり得るのではないでしょうか。 http://www.nature.com/nature/journal/v449/n7161/full/449378a.html

(無題) 削除/引用 No.3291-9 - 2010/10/07 (木) 14:14:02 - まうす もし、受精卵が分裂後にマターナルのCreタンパク質で組み換わった場合、floxとkoのキメラになると思いますが、実際に、そういう仔も生まれてきますか？　もしくは組み換えは、受精卵の分裂前に100%完了しますか？ ---- 少し違うことですが、教えてください。 Rosa.CreはCre+の仔が1:1に生まれてこないのですが、CAG.Creもそうなりますか？

(無題) 削除/引用 No.3291-8 - 2010/10/06 (水) 23:56:47 - ポスドクT ROSA26-Creではなく、 CAG-Creを使用しています。 CAG-Cre Tgの場合、 CAG-Cre♂を使用した場合はCAG-Cre遺伝子を持った仔でしかfloxは抜けませんが、CAG-Cre♀を使用した場合はCAG-Cre遺伝子の有無に関わらずfloxは100%抜けています。 これは受精卵の細胞質がほぼ卵由来であることに起因しているようです。 少なくともCAG-Creマウスでは、CAG-Cre遺伝子の有無に関わらず、 全ての卵の細胞質に十分量のCreタンパク質が存在しているようです。 ROSA26は基本的に全ての細胞で一定量発現していることが前提だと思いますので、CAG-Creと同じ結果になるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3291-7 - 2010/10/04 (月) 14:27:13 - まうす Rosa.Cre-ヘテロオスとloxpメスの交配では組み換わった子供は生まれていなくて、卵からだけです。コロニーを作り始めたところで、たくさんの数を見ていませんけれど。 Rosa.Creのブリディングはメスを使った方が効率がいいのかな？と思っています。

(無題) 削除/引用 No.3291-6 - 2010/10/04 (月) 10:12:49 - み TK-1さんコメント有難うございます。 卵由来ですか、盲点でした。 TAT(protein transduction domain融合）-Creというものもあるのですね。 確かにこれだったら危険性はありますね。 まあ普通のCreマウスを使用している場合は殆ど考えなくても良いレベルですかね。 他に経験者などがおられたら意見を伺いたく。

(無題) 削除/引用 No.3291-5 - 2010/10/04 (月) 09:25:41 - まうす 理屈として起こりえるが、聞いたことがない、ということでしょうか。 Creヘテロはメスなのですが、卵子に母由来のCreタンパク質が残っていて、受精後にloxが組変わったのかと思いました。。。 もう一度ジェノタイピングし直すのと、このマウスの子孫の遺伝子型も見てみます。 もし経験がある方がいらしたら、ご意見をいただけると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.3291-4 - 2010/10/04 (月) 01:19:28 - TK-1 >[Re:3] みさんは書きました : > >[Re:2] TK-1さんは書きました : > > > > > マターナルのCreタンパク質が伝達して、Cre遺伝子ネガティブの子供のloxpがKOに組換わることはあるのでしょうか。 > > あります。 > > maternal-Creの伝達はかなりの頻度で起こるものでしょうか？ > > 機序は血中に遊離したCreタンパクが仔マウスに取り込まれるのでしょうか？ 間違いですね。意味としてはoocyteに蓄積したCreが精子由来のloxP alleleを切ってしまう場合です。でも、減数分裂前のCreが受精時までそのまま残っていることは無いかもしれませんね。Tat-creでもない限り、血中のcreが細胞に入ることは無いでしょう。

(無題) 削除/引用 No.3291-3 - 2010/10/03 (日) 17:19:51 - み >[Re:2] TK-1さんは書きました : > > > マターナルのCreタンパク質が伝達して、Cre遺伝子ネガティブの子供のloxpがKOに組換わることはあるのでしょうか。 > あります。 > 私はこの手の専門科ではないので初耳の現象で興味あります。またConditional-KOを使用する場合に大きな問題になるので可能ならお答え下さい。 maternal-Creの伝達はかなりの頻度で起こるものでしょうか？ 機序は血中に遊離したCreタンパクが仔マウスに取り込まれるのでしょうか？ また、起こる時は1個体の子供に着目した場合、キメラの状態でKOされているのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3291-2 - 2010/10/03 (日) 00:43:34 - TK-1 >[Re:1] まうすさんは書きました : > Rosa26.creのヘテロとloxp-ckoを掛け合わせた際、Cre遺伝子ネガティブのckoが生まれることはありますか？ あります。どうしてないと思うのですか。 > ジェノタイピングでそういう仔が生まれましたが、PCRのミスの可能性もあります。 確かめたければ、サザンをしてください。 > マターナルのCreタンパク質が伝達して、Cre遺伝子ネガティブの子供のloxpがKOに組換わることはあるのでしょうか。 あります。

Rosa26.creとloxpの交配 削除/引用 No.3291-1 - 2010/10/02 (土) 09:46:38 - まうす Rosa26.creのヘテロとloxp-ckoを掛け合わせた際、Cre遺伝子ネガティブのckoが生まれることはありますか？ ジェノタイピングでそういう仔が生まれましたが、PCRのミスの可能性もあります。 マターナルのCreタンパク質が伝達して、Cre遺伝子ネガティブの子供のloxpがKOに組換わることはあるのでしょうか。

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