全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3285-7 - 2010/10/01 (金) 19:49:01 - Ficoll初心者 -さん ありがとうございます。 バフィーコートも節約するためには力強い手段ですね。 ありがとうございます。 私どもが重視する方法として、採血後できるだけ速やかに単離、 共培養したいと考えておりますので、今の実験系が今後も続くようでしたら教えていただいた方法でtryしてみます。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.3285-6 - 2010/10/01 (金) 18:57:18 - - バフィーコートにしてからFicollで分離すると、 少量のスケールで分離できますよ。

(無題) 削除/引用 No.3285-5 - 2010/10/01 (金) 15:06:40 - Ficoll初心者 amiさん 非常に興味深いコメントありがとうございます。 >22.5mlの血液をPBSで2倍希釈 = 45ml ↓ Ficoll-Paque PLUSを5mlゆっくり下層 計50ml ↓ 遠心 これに関して、質問よろしいでしょうか？ 1. いまいち順番が分からないのですが、Ficoll 5 mlに、血液45 mlをゆっくりと重層、ということでしょうか？ 2. amiさんは私と同様リンパ球の単離が目的でしょうか？ なんとなく、Ficollが極端に少ないと、顆粒球がリンパ球層にコンタミしそうな気がするのですが、その点amiさんの系では問題ないのでしょうか？あるいはmom-aさんと同様、MACSで再度purificationの手順を踏んでリンパ球の単離を行っているからでしょうか？ 私は、FicollのみでNKを含むMNCsを分離したいと考えております。（特に赤血球以外の他の細胞がコンタミしてもそれほど気にはなりません。） 3. Ficollには赤血球の凝集作用があるかとは思いますが、血液22.5 mlに対してFicollがたったの5 mlで十分凝血できるものなのでしょうか？RBCのリンパ球層へのコンタミはありますか？ お時間が有りましたら、ご回答いただけますと幸甚です。

むっちゃけちけち 削除/引用 No.3285-4 - 2010/10/01 (金) 14:46:48 - ami 22.5mlの血液をPBSで2倍希釈 = 45ml ↓ Ficoll-Paque PLUSを5mlゆっくり下層 計50ml ↓ 遠心

(無題) 削除/引用 No.3285-3 - 2010/10/01 (金) 14:16:53 - Ficoll初心者 mom-aさん ありがとうございます。 >50mLチューブにFicoll-Paque Plusを15mL入れる。希釈した血液25mLを重層する。 大変参考になりました。 scaleを大きくすると、15 mlでtotal volumeを増やすより、50 ml tube等利用して直径を増やした方がbetterなんですね。たしか添付文書にもそう書かれてありました。 添付文書にはFicoll-Paque PLUS 2.4cm高に、2倍希釈した末梢血3 cm高を重層するとありましたので、それがそれぞれ15 ml, 25 mlなんでしょうね。 ありがとうございます。大変助かりました。

大体こんな感じ 削除/引用 No.3285-2 - 2010/10/01 (金) 13:46:40 - mom-a １）血液をPBS(-)で2倍希釈する。 ２）50mLチューブにFicoll-Paque Plusを15mL入れる。 ３）希釈した血液25mLを重層する。 ４）1200rpm（あ、g表記になってませんね。普通の（？）スイング・ローターなんですが…。）室温で30分遠心する。 ５）MNCs層を集める。 上記のようにやっていましたが、もしかしたら少しアバウトなところがあるのかもしれません（どうせこの後MACS分離するし…などと思っていた可能性ああり）。お手元のmethodと照らし合わせて細かい条件は予備検討で確認して下さい。

Ficoll-Paque PLUSをlarge scleで使用したい。 削除/引用 No.3285-1 - 2010/10/01 (金) 12:18:30 - Ficoll初心者 みなさまお世話になります。 totleの件で、large scaleでこの試薬を使用したいと思っております。 添付文書には、末梢血2 mlからのMNCs分離のmethodは書かれてあるのですが、large scale例えば末梢血25-50 mlからこの試薬を使用してMNCsを分離する方法をご存知の方がおられましたら、どうかご教示いただけませんでしょうか。宜しくお願いいたします。

全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---