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rRNA前駆体の検出 トピック削除
No.3274-TOPIC - 2010/09/28 (火) 20:03:18 - やまもとやま
初めまして。
私は、あるタンパク質Aが、rRNAのプロセッシングに働いているかどうかを検証しています。
現在、ヒト細胞中でタンパク質Aをノックダウンし、rRNA前駆体が蓄積するかを検出しようと思っています。

このrRNA前駆体の蓄積を検出する場合、多くの論文では、RIラベルしたプローブを用いたノーザンブロッティング行っているのですが、私自身RIの使用に関してはまったくの素人であるため、蛍光プローブを用いたノーザンブロッティングで検出しようと考えています。

そこで伺いたいことがあるのですが、蛍光プローブをもちいたノーザンブロッティング、もしくは、そのほかの方法で、少量の核酸を検出することは可能でしょうか?
お勧めの試薬等あれば同時に教えていただけると幸いです。

つたない質問ではありますが、どうぞご教授よろしくお願いたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3274-2 - 2010/09/29 (水) 12:27:59 - おお
蛍光はかなりRIに比べて弱いです。
プローブをビオチンなどでラベルして最終的にアルカリフォスファターゼ、発光試薬で検出した方が感度がでます。
ロッシュなどが、その手の試薬のキットを昔から打っていたと思います。んGEかな、、、

あとはプロセッシングされたマチュアーなものが検出されないプライマーを設計してRT-PCRでしょうか。

rRNA前駆体の検出 削除/引用
No.3274-1 - 2010/09/28 (火) 20:03:18 - やまもとやま
初めまして。
私は、あるタンパク質Aが、rRNAのプロセッシングに働いているかどうかを検証しています。
現在、ヒト細胞中でタンパク質Aをノックダウンし、rRNA前駆体が蓄積するかを検出しようと思っています。

このrRNA前駆体の蓄積を検出する場合、多くの論文では、RIラベルしたプローブを用いたノーザンブロッティング行っているのですが、私自身RIの使用に関してはまったくの素人であるため、蛍光プローブを用いたノーザンブロッティングで検出しようと考えています。

そこで伺いたいことがあるのですが、蛍光プローブをもちいたノーザンブロッティング、もしくは、そのほかの方法で、少量の核酸を検出することは可能でしょうか?
お勧めの試薬等あれば同時に教えていただけると幸いです。

つたない質問ではありますが、どうぞご教授よろしくお願いたします。

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