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(無題) 削除/引用 No.3218-3 - 2010/09/18 (土) 11:20:12 - おお こう言うのってまずタイターを測らないの、スタンダードな細胞とかで、、、

Re:レトロウイルスベクターの感染性 削除/引用 No.3218-2 - 2010/09/18 (土) 07:30:35 - 酷暑 1年前にレトロウイルスベクターを用いた実験で苦労していた者です。 もう少し詳しい実験条件、ベクターの量、導入試薬、細胞のまき数を書いて頂いた方が良いのですが、私の経験では下記のようなことに気をつけて改善しました。 1．ウイルス産生細胞、感染する細胞ともだらだらと培養したものを使わない。起こして数日で使えるように細胞ストックを用意する。継代数は若い方が良い 2．ウイルスの感染は2、3回行う 3．GFPコントロールを取って、ウイルス力価がどのくらいかをチェックする 頑張って下さい

レトロウイルスベクターの感染性 削除/引用 No.3218-1 - 2010/09/17 (金) 09:14:02 - 口内炎 現在ヒトのリンパ球系の株化細胞にレトロウイルスベクターを用いて、cDNAライブラリーを導入する実験を行っています。しかし感染性が低いのが問題となっています。 レトロウイルスのエンベロープにはVSV-Gを用いていますが、感染性がいまいちです。GFP発現レトロの培養上清を単純に感染させた場合では1％以下の感染率です。PEGで40倍程度濃縮してみましたが、あまり変わりはありませんでした。 またPolybreneの濃度も振ってみましたが、あまり変わりはありませんでした。 濃縮して、感染時に遠心(1000g, 60min)を行うと少しましになりまして5％くらいになります。 今後効率的に実験を進めるためには20-30％程度感染してほしいので、他にいい方法はないのか検討中です。 そこで皆様に質問があるのですが、 １．AmphotropicなenvとVSV-Gを比べた場合、やっぱりVSV-Gの方が効率いいのでしょうか？ ２．RetronectinはVSV-Gでは効果はあまり期待できないのでしょうか？ ３．ampho+Retronectinにしたら改善される可能性があるでしょうか？ ４．他になにかいい方法をご存知ですか？ どうぞよろしくお願いいたします。

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