補体第二経路の活性をELISAで見たいんですが、実験系がうまく動きません。どなたか詳しい方アドバイスをお願いします。
100ug/ml LPS(50ul)でplate coatして
GVBバッファー(10mM EGTA, 30mM Mg2+)で1/10に希釈した血清を
加えて37℃で1h incubateして蓄積したC3を測っています。
古典経路やMBL経路はワークしているんですが、第二経路だけワークしていません。室温で血を固めたあとに上清を3000rpmで回収しさらに20000rpmで遠心したあとの血清をサンプルとして用いています。 |
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