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補体第二経路 トピック削除
No.3204-TOPIC - 2010/09/15 (水) 13:01:17 - こんぷりめんと
補体第二経路の活性をELISAで見たいんですが、実験系がうまく動きません。どなたか詳しい方アドバイスをお願いします。

100ug/ml LPS(50ul)でplate coatして
GVBバッファー(10mM EGTA, 30mM Mg2+)で1/10に希釈した血清を
加えて37℃で1h incubateして蓄積したC3を測っています。

古典経路やMBL経路はワークしているんですが、第二経路だけワークしていません。室温で血を固めたあとに上清を3000rpmで回収しさらに20000rpmで遠心したあとの血清をサンプルとして用いています。
 
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(無題) 削除/引用
No.3204-2 - 2010/09/15 (水) 21:42:51 - うーん
LPSはroughタイプなのか、smoothタイプなのかでwellへの固相化は違うはず。
私も96-well formatのplate選びに随分苦労しました。

というわけで、LPSガきちんとwellに固相化されているのかなと。。

補体第二経路 削除/引用
No.3204-1 - 2010/09/15 (水) 13:01:17 - こんぷりめんと
補体第二経路の活性をELISAで見たいんですが、実験系がうまく動きません。どなたか詳しい方アドバイスをお願いします。

100ug/ml LPS(50ul)でplate coatして
GVBバッファー(10mM EGTA, 30mM Mg2+)で1/10に希釈した血清を
加えて37℃で1h incubateして蓄積したC3を測っています。

古典経路やMBL経路はワークしているんですが、第二経路だけワークしていません。室温で血を固めたあとに上清を3000rpmで回収しさらに20000rpmで遠心したあとの血清をサンプルとして用いています。

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