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(無題) 削除/引用 No.3200-4 - 2010/09/14 (火) 22:29:29 - しあ >[Re:3] ATGCさんは書きました : > 実験の目的を考えた時、３重鎖構造をとり、機能を維持した天然状態のコラーゲンをみる必要があるのかな（それだとそももそもSDS-PAGEは向かないね）、それとも、変性して３本鎖にほぐれたひとつひとつのコラーゲン鎖でOKなのかどっちかな。 >>お答えありがとうございます。実験系的には三本鎖構造のコラーゲンを見たいと考えていますが、そうですよね・・分子量的にも泳動に多少無理はありますよね。 >[Re:2] YYYさんは書きました : > 例えば�T型コラーゲンのタンパク質（アルファIとかII)の発現をウエスタンブロットで見たい場合は、他のタンパク質と同じようにSDS＋メルカプトエタノールなどで変性させて行えば、それぞれ一本に解離したコラーゲンタンパク質を検出できると思いますけど。 > あなたが言っているのは３重のコラーゲン構造をNative-PAGEで見たいということなんでしょうか？ > ３重が還元されてほぐされるとなぜコラーゲンでなくなってしまうのでしょうか？一本一本のタンパク質がコラーゲンタンパク質では？ >>説明不足のようで申し訳ありませんでした。三重構造のままで検出したいと思っています。 でもそれはコラーゲンの分子量的に無理があるようですね・・＞＜

(無題) 削除/引用 No.3200-3 - 2010/09/14 (火) 21:56:29 - ATGC そうだね、コラーゲンが変性して３重鎖がほどけた変性コラーゲンはゼラチンていうから名前的にはコラーゲンじゃないね。でも各１本をコラーゲン鎖という言い方もするしまあそんなことどうでもいいか。いいね。実験の目的を考えた時、３重鎖構造をとり、機能を維持した天然状態のコラーゲンをみる必要があるのかな（それだとそももそもSDS-PAGEは向かないね）、それとも、変性して３本鎖にほぐれたひとつひとつのコラーゲン鎖でOKなのかどっちかな。みんながこの質問に答えるにはそれは大事な情報だね。コラーゲンものすごい大きい分子だからSDS-PAGEだと還元、変性させないとゲルに入りにくいしはいっても上の方で詰まってなんだか分かんないとおもう。だからやっぱり一般的な生化学的な分析するならふつうに還元、変性させるとおもう。というか実際してた。抗体は多くの場合、特定のアミノ酸配列を認識するので、変性しててもペプチド構造(一次構造）が破壊されない限りちゃんと反応するから平気だよ。ただ特有の高次構造を認識するようなすごい抗体だと変性したら反応出来なるから、もし使ってるのがそういう系ならば変性には注意が必要だね。

(無題) 削除/引用 No.3200-2 - 2010/09/14 (火) 19:03:56 - YYY 何が目的なのかよくわかりませんが、 例えば�T型コラーゲンのタンパク質（アルファIとかII)の発現をウエスタンブロットで見たい場合は、他のタンパク質と同じようにSDS＋メルカプトエタノールなどで変性させて行えば、それぞれ一本に解離したコラーゲンタンパク質を検出できると思いますけど。 あなたが言っているのは３重のコラーゲン構造をNative-PAGEで見たいということなんでしょうか？ ３重が還元されてほぐされるとなぜコラーゲンでなくなってしまうのでしょうか？一本一本のタンパク質がコラーゲンタンパク質では？

コラーゲンの加熱還元 削除/引用 No.3200-1 - 2010/09/14 (火) 18:08:55 - しあ SDS-PAGEをしコラーゲン抗体でウェスタンブロッティングの際、サンプル、またゲルを還元処理しても大丈夫なのでしょうか？？ 加熱還元処理をした場合、コラーゲン構造が壊れてしまうため、コラーゲンそのものの検出はできない気がするのですが・・

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