全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3187-5 - 2010/09/16 (木) 10:06:39 - みみ プレートが乾燥してうすうすになってると生えないことがありますよ。 見た目大丈夫そうですか？

(無題) 削除/引用 No.3187-4 - 2010/09/15 (水) 12:14:12 - 江 プレートが古くてampがだめになってたならコロニーがいっぱい出てしまうはずです････

(無題) 削除/引用 No.3187-3 - 2010/09/11 (土) 15:14:50 - t ＞おおさん ご意見ありがとうございます。 一度失敗したので、別のテンプレートで同様の寒天培地を使用してみても同じ結果だったので、プレートを疑っていました。 もう一度、一つ一つの実験操作を確認してみます。 お忙しい中、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3187-2 - 2010/09/11 (土) 14:33:06 - おお 今回はプレートのせいではないと思います。 4カ月はampでは流石に長いと思いますが、それでもコロニーが生えない訳ですからampがダメになったわけではないと思います。そのほかの成分はそれぐらいの期間でも比較的大丈夫です。 まあプレートを疑うならつべこべ言わずに作り直せば良いじゃないですか? こういうのって結構いろんなところに落とし穴があります。 PCRが見かけかかっていても、きっちりしたプロダクトができていないとか、、コンぴがへたっているとか、燐酸かがうまくいってないとか、、、 １度各ステップを見直していった方がいいと思います。トランスフォーメーションのDNAは通常より若干多目でも良いと思います。 DNAがメチル化されてないのでターゲットにされやすいでしょうし。

大腸菌の形質転換に使用する寒天培地について 削除/引用 No.3187-1 - 2010/09/11 (土) 14:13:32 - t 私は、実験初心者です。初歩的な質問で申し訳ありません。 私はプライマーを設計し、以前に作成したプラスミドをテンプレートとしてInverse PCRを行い、大腸菌を形質転換することで新たな変異を付加したプラスミドを作成しようとしています。しかし、実験を行った結果、Amp入りのLB培地に大腸菌のコロニーが一つも生えませんでした。 以前にもInverse PCRを行ったことがあり、その際には大腸菌も増えて目的のプラスミドを得ることができました。 前回の実験と今回の実験で異なる点は 1)プライマー 2)プラスミド 3)Amp入りLB培地が4℃で4ヶ月間保存されていたもの（前回は4℃で1週間保存されていたAmp入りLB培地） 私は、寒天培地が古すぎるのが失敗の原因ではないかと考えていますが、指導してくださっている方が、4℃保存してたら大丈夫だとおっしゃっています。保存期間がどれくらいまでだと大腸菌の形質転換が成功するのでしょうか？培地の保存期間など関係ないのでしょうか？ よろしければ、ご意見をお願いいたします。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---