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RNAlaterは？ 削除/引用 No.3181-4 - 2010/09/13 (月) 01:00:15 - へまと RNAlaterを使ってみては。 AmbionのRiboPure Blood Kitのプロトコールに全血からのRNAの抽出がのっています。 RNAlaterも自作すれば、安価でかなり大量に作れるのでコストパフォーマンスもよいと思います。

(無題) 削除/引用 No.3181-3 - 2010/09/10 (金) 15:21:40 - mom-a >どうしてもサンプルの輸送の都合上、12時間以上経ったサンプルを使用する おそらく、病院かどこか施設で採血してもらったものを送付してもらうor取りに行って分離するということではないかと想像するのですが、そうするとここを変えるのは確かに難しそうですね。 先方に分離までお願いするわけにはいかないでしょうし、自分でやるにしても先方には使わせてもらえる設備がないかもしれませんし。 単核球を分離後、培養して分化などの実験に使ったことがあります。私はFicoll-plusを使いましたが、Lymphoprepを使っていた人もいました。 確かに、なるべく新鮮な方が細胞は元気です。12時間以上経過したものでも使っていましたが、RNAの抽出となると話が違ってくるでしょう。 可能であれば、サンプルを分離してみて、生存率、コンタミの有無などを確認してみてはいかがでしょうか。各サンプルでも差はあるでしょうから、毎回同じという保証はできませんが、目安にはなるでしょう。 生存率が低いと厳しいと思いますが、他細胞のコンタミについては、FACSやMACSが使用できる環境であれば除去できるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3181-2 - 2010/09/10 (金) 14:47:24 - Pumpkin >サンプルは何時間経過したものまでなら使用しても大丈夫 分かっていて敢えて質問しているのでしょうけれど、「何時間なら大丈夫」なんて言える人はいませんよ。それこそサンプルが置かれている状況によるし、大丈夫かどうかは実際に実験しないと保障できないですよね。 >どうしてもサンプルの輸送の都合上、12時間以上経ったサンプルを使用する 本当にここを改善できないのでしょうか。サンプル保全の点からもRNA抽出の点からも分離したらなるべく速やかに抽出したいところですよね（12時間も経ったらRNAのプロファイルは変わるし、分解も起こるでしょ）。すくなくとも分離した単核球をTRIzolとかRNAlaterとかのRNA保存溶液に移してから移動させるとか、液体窒素で凍らせてドライアイス下で運搬するとかなんとかできないんですか。トピ主さんの状況を理解してあげれませんが、僕なら底の改善に努力を払いますね。

時間が経った血液からの単核球の分離 削除/引用 No.3181-1 - 2010/09/10 (金) 14:23:31 - TA PCRを始めたばかりのものです。 現在、ヒト全血から血球分離溶液(Lymphoprepを使用しています)により単核球を分離し、そこからRNAを抽出→cDNAを逆転写して作成→PCRにて定量という実験を行っています。 Lymphoprepには採血から12時間以上経過したものは赤血球・顆粒球のコンタミのため使用しないでくださいとの記述があります。 ですが、どうしてもサンプルの輸送の都合上、12時間以上経ったサンプルを使用する必要があります。 12時間以上経ったサンプルについても単核球を分離し、RNAを抽出する方法はありますでしょうか。 また、時間経過によるRNAの分解等の問題もあると思うのですが、サンプルは何時間経過したものまでなら使用しても大丈夫なのでしょうか。 初心者質問で申し訳ありませんが、よろしくお願いします。

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