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(無題) 削除/引用 No.3123-6 - 2010/09/01 (水) 17:56:58 - A > 組換え蛍光タンパク質ベクターを作製し、BL21(DE3)に形質転換したのですが、コロニーが光りません。 参考になるかわかりませんがTG1にQiagenのｐQEベクターの組み合わせで 形質転換したことがありますが、少なくとも自分の場合は発現の漏れが あるらしくコローニーの色が明らかに違いました。もちろんこれがトピ 主さんの場合にあてはまるとは限りませんが、？さんがおっしゃっている ようにポジコンが光っているのであれば光った方が自然な気がします。

(無題) 削除/引用 No.3123-5 - 2010/09/01 (水) 14:39:44 - ？ ＞初歩的な質問なのですが、蛍光タンパク質ベクターを形質転換した場合、コロニーはその蛍光タンパク質の色に光るのでしょうか？ こう聞いているのに、 ＞ちなみに、ポジコンは光ります。 じゃぁ光るんじゃないの？

(無題) 削除/引用 No.3123-4 - 2010/09/01 (水) 13:48:59 - AP 組換え蛍光タンパク質ベクターを作製といわけれも構造、骨格の情報をあげなければ無意味。ポジコンといわれても何をしたのかわからない。 BL21(DE3)を使っていることから仮にpETのどれかを使っているとして、IPTGで発現誘導はかけているのでしょうか？そうでなければほとんど発現しないはず。ちなみにサブクローニングでつかうような、多コピーでlacIの甘いヴェクター・宿主の系だと、誘導しなくてもコロニーがうっすら緑色だったり、ブラックライトで蛍光を発したりすることもある。

(無題) 削除/引用 No.3123-3 - 2010/09/01 (水) 13:48:24 - g-aj 目で見える蛍光があることもありますが、 光らないコロニーが外れとは限りません。 コンストラクトの成功失敗は制限酵素消化なりで見る物であって、 コロニーの蛍光は判断材料にすべきでは無いと思います。

(無題) 削除/引用 No.3123-2 - 2010/09/01 (水) 13:48:04 - 小言幸兵衛 ケースバイケースです。というか、誘導を掛けていなければ光らないのが普通でしょう。

蛍光タンパク質の形質転換 削除/引用 No.3123-1 - 2010/09/01 (水) 13:13:15 - いさん 組換え蛍光タンパク質ベクターを作製し、BL21(DE3)に形質転換したのですが、コロニーが光りません。 初歩的な質問なのですが、蛍光タンパク質ベクターを形質転換した場合、コロニーはその蛍光タンパク質の色に光るのでしょうか？ ちなみに、ポジコンは光ります。

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