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(無題) 削除/引用 No.3107-6 - 2010/08/29 (日) 23:19:38 - RE boston様、ami様： やはり切れませんよね。あきらめてほかのREサイトを使うことにしました。 あかね様： 思いもつかなかったアイデアです。 ３断片をLigationですか。そういう手もありましたね。 ただ今回は、普通にほかのサイトを使うことにして、素直にやり直します。 今後の参考にさせていただきます。 みなさま、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3107-5 - 2010/08/29 (日) 20:02:12 - あかね ペクターを２つに分けて切ってはどうですか？ 例えば、 ScaI+ XhoI vector fragment ScaI+ BglII vector fragment Xho + BglII insert fragment の３つの組み合わせでLigationするんです。 この場合、ScaIはAmpR内にあるサイトです。

切れません 削除/引用 No.3107-4 - 2010/08/29 (日) 00:13:43 - ami 切れません。

(無題) 削除/引用 No.3107-3 - 2010/08/28 (土) 21:07:13 - RE Boston様： 表記ミスでした。すみません。（C/Gが１つ多かったのですね） BglII site --A^GATCTCGAG-- --TCTAGA^GCTC-- XhoI site --AGATC^TCGAG-- --TCTAGAGCT^C-- やはり切れませんか。。。覚悟はしておりましたが。

(無題) 削除/引用 No.3107-2 - 2010/08/28 (土) 20:49:53 - Boston XhoI の配列が typo だとしても、理論上、無理だと思います。

BglIIとXhoIサイトがオーバーラップしているとき 削除/引用 No.3107-1 - 2010/08/28 (土) 19:12:55 - RE いつも勉強させて頂いております。 DNA断片をサブクローニングするため、 組み込みたいベクターのMCSから、制限酵素サイトBglIIとXhoIを選び、 酵素消化したのですが（バッファーが共通だったため、Double digestionした）、 今となって、次のように、それら２つのサイトが１塩基オーバーラップしていることに気づきました。 BglII site --A^GATCTCCGAG-- --TCTAGA^GGCTC-- XhoI site --AGATC^TCCGAG-- --TCTAGAGGCT^C-- この場合、やはり切れないものでしょうか？ 一応、週明けにLigation、Transformationまでやってみようかと思っているのですが、 明らかに切れないのであれば、途中でやめようかと思います。。。 よろしくお願いします。

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