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マウス胎児の解析方法 トピック削除
No.3086-TOPIC - 2010/08/24 (火) 16:16:58 - yoichi
実験初心者でどう動けばいいかわかりません。
そこで、ここでアドバイスいただきたく投稿しました。

現在ある遺伝子をターゲットしてマウスを用いた解析を行っています。
その遺伝子をノックアウトしたマウスを作製したのですが、胎生期(E、8.5)でいなくなってしまうことまでわかっています。
私は、先生から、その8.5日前の胎児ならノックアウトマウスの胎児がいる、それを切片にして免染しろ(細胞増殖系の交代で)とのことでした。
しかし、やってはみたものの切り方で、当然ですがだいぶ違いが出てきて、さらに、ジェノタイプができない(胎児が小さくて切片かジェノタイプどちらかしかできない)のがネックになっています。

どのような時に有用な解析方法があれば教えていただきたいです。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3086-3 - 2010/08/24 (火) 19:35:37 - em
8.5だったら卵黄嚢がついてると思うので、それでタイピング。
嚢付きで染色したいなら、胎盤のごく胎児に近いところは胎児由来だったと思います。
E8.5胎児は小さくてはじめは難しいかもしれませんが、すぐに慣れると思いますよ(少なくとも野生型は)。

染めた後で 削除/引用
No.3086-2 - 2010/08/24 (火) 19:05:49 - ema
>胎児が小さくて切片かジェノタイプどちらかしかできない
は、胎児にはSer#をつけてとりあえず切片を染めて、観察データを取った後にスライドからはがしてTypingをする。程度のことはできるかも。

マウス胎児の解析方法 削除/引用
No.3086-1 - 2010/08/24 (火) 16:16:58 - yoichi
実験初心者でどう動けばいいかわかりません。
そこで、ここでアドバイスいただきたく投稿しました。

現在ある遺伝子をターゲットしてマウスを用いた解析を行っています。
その遺伝子をノックアウトしたマウスを作製したのですが、胎生期(E、8.5)でいなくなってしまうことまでわかっています。
私は、先生から、その8.5日前の胎児ならノックアウトマウスの胎児がいる、それを切片にして免染しろ(細胞増殖系の交代で)とのことでした。
しかし、やってはみたものの切り方で、当然ですがだいぶ違いが出てきて、さらに、ジェノタイプができない(胎児が小さくて切片かジェノタイプどちらかしかできない)のがネックになっています。

どのような時に有用な解析方法があれば教えていただきたいです。

よろしくお願いします。

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