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(無題) 削除/引用 No.3057-6 - 2010/08/20 (金) 18:20:58 - 免疫 まずきちんとマクロファージが誘導および採取されているのかを確認するために、一度はフローサイトでチェックしたほうがよさそうですよね。 存在する細胞集団中のマクロファージの相対的な大きさや割合もわかるでしょうし、いろんな情報が得られると思います。 あと、問題となるほど赤血球の混入が多い場合、血管を傷つけてしまっている可能性が高いのではないでしょうか？ そうすると、他の血球のコンタミも否定できなくなりますので、今回のように様々な大きさの細胞が見えてきてしまうのかもしれません。 自分は見た目で判別できるほど赤血球のコンタミが生じた場合、そのサンプルは極力除外します。

(無題) 削除/引用 No.3057-5 - 2010/08/20 (金) 12:59:49 - MMM 私はperitoneal lavageを遠心して、培地にsuspendして全てplatingしてしまいます。この時点ではRBC, WBCのコンタミはありますが、2-3時間後にPBSでdishを洗い、「dishに接着した細胞」＝「マクロファージ」としてしまう方法が一般的ではないでしょうか。 私はRBC lysisも細胞数カウントもせず、thioglycolate誘導なら10週齢前後のマウス1匹=15cm2の計算でplatingしてしまっています。

(無題) 削除/引用 No.3057-4 - 2010/08/20 (金) 12:55:55 - 南の島の「み」 いきなりカウントせずに、いったんシャーレにまいて、接着した細胞を回収した後カウントするのはいかがですか？実験の系に不都合なければの話ですが．

(無題) 削除/引用 No.3057-3 - 2010/08/20 (金) 00:54:07 - うーん チュルク液というのはご存知ですか？これで細胞浮遊液を希釈すればRBCは除けますよ。 cell countごときで抗体で染めるのは躊躇いがありますね。 しかも抗体で染めてFACSしても相対的な存在比率（MΦとnonMΦとの比率）は出せますが絶対数は出せませんしね。 RBCさえ除ければ大分すっきりすると思いますよ。ああ、でも腹腔洗浄液か…

(無題) 削除/引用 No.3057-2 - 2010/08/19 (木) 23:03:53 - 5th マクロファージの表面マーカーとかの抗体で染めて細胞の大きさとの関係を見れば銅でしょうか。

マウス腹腔マクロファージ 削除/引用 No.3057-1 - 2010/08/19 (木) 22:15:29 - まうす はじめまして。 チオグリコレートで刺激したマウスから腹腔マクロファージを採取し 血球計算盤を用いてカウントしようとしたのですが、顕微鏡下の細胞は ざっと大きさでわけて3種類存在するように見えます。 1.明らかに大きいもの 2.明らかに小さいもの（赤血球？） 3.1と2の中間の大きさのもの 2は赤血球だと思うのですが、教えてもらう人によって「1のみがマクロファージだ」、 「いや1と2がマクロファージだ」という人がいて混乱しています。 うちのラボではマクロファージを扱うことがほとんどないので、周りに聞ける人がいません。 皆様はどの細胞をマクロファージとしてカウントしているかご教示ください。 よろしくお願いいたします。

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