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(無題) 削除/引用 No.305-8 - 2009/04/11 (土) 02:41:55 - おお あと、膜は通常ウエスタンでは0.4umポアの物を使いますね。 私は常に0.2umのものを使うようにしています。そちらのほうが 保持力が強いです。私の場合はそれでかなり抜けるのは防げているような きがします。 PVDFだとメタノールを入れずにトランスファーされるひとが いますね、そういうのだと抜けやすくなるかもしれません。 タンパクのつきやすいつきにくいも確かにあるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.305-7 - 2009/04/10 (金) 19:21:34 - 名無し ウェットで、SDS入れて、時間かけて高分子量のものがしっかり転写できるような条件でも低分子量のものも含めて抜けてる感じはないです。むしろ（時間や分子量に関係なく）移りにくくてゲルに残る蛋白質がある方が気になります。蛋白質によってはPVDFとニトロセルロースでも保持のされ方に違いがあるらしいです。抜ける問題はたとえば0.22μmのニトロセルロース膜とか使うことで改善されないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.305-6 - 2009/04/10 (金) 18:30:36 - aimar Kさんと同様に、メンブレンを２枚重ねてトランスファーしたら低分子量（１万から２万程度）のものはどちらのメンブレンにもばっちり検出されましたよ。

タンパク質の大きさ次第だと思います 削除/引用 No.305-5 - 2009/04/10 (金) 17:55:11 - TS 私の感覚と経験的には、30kDa以下のタンパク質は、通り抜けると思います。 特に20kDa以下の時は、転写条件が過剰になりすぎないように気をつけています。 その証拠（？）に、小さいタンパク質用のPVDFが販売されていますね。

(無題) 削除/引用 No.305-4 - 2009/04/10 (金) 14:32:15 - おお 条件とかでいろいろ状況が変わってくると思いますが、、 トランスファーバッファーにSDSを入れるプロトコールでは抜けやすくなると思います。 ある程度抜けることを利用してニトロセルロースで数枚重ねて、 一つのゲルから複数の膜に転写するということもやられることがあるようです。 SDSフリーでPVDFであればまあ安心でしょう。

(無題) 削除/引用 No.305-3 - 2009/04/10 (金) 13:14:05 - 中年 ご参考までに。 http://www.ims.u-tokyo.ac.jp/ohmiken/Lab%E3%83%A1%E3%83%A2/memo16.html

(無題) 削除/引用 No.305-2 - 2009/04/10 (金) 12:52:11 - K トランスファーの条件決定をしたときに「抜けた」のを確認しました。 メンブレンを2枚重ねてトランスファーし、時間をふりました。 その結果1枚目を抜けて2枚目に抜けたタイムポイントがあったので、 ありうることだと認識しています。

ウエスタンブロットのトランスファー 削除/引用 No.305-1 - 2009/04/10 (金) 12:40:25 - cham ウエスタンブロットのトランスファーに関してなのですが，よく長くやるとメンブレンをとおりぬけると聞いたことがあるのですが本当でしょうか？ 理論的にはあるのでしょうが，実際結構長くやってもきちんと検出されていて問題を感じたことはありません． 長くやりすぎて，メンブレンにタンパクがなかったという経験のあるかたいますでしょうか？

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