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(無題) 削除/引用 No.3026-5 - 2010/08/17 (火) 10:16:16 - ats >[Re:3] ひろしさんは書きました : > また、目的の蛋白のアミノ酸の25％ほどが疎水性アミノ酸であるため との事ですが、目的の蛋白＝5-10kDaのpeptideなら、アルブミンやグロブリンに結合している可能性もあります（全量ではないかも）。この場合、5-10kDa分画には得られませんので、ご注意を。

(無題) 削除/引用 No.3026-4 - 2010/08/16 (月) 14:35:37 - AP G-25の分画分子量範囲は1〜5 kDa（球状タンパク質として）なので不適当です。G-50の場合は1.5〜30 kDaなのでちょうど良いと思います。ペリスタティックポンプで連続的に送液してフラクションをとるという初歩的な方法で良いと思います。かつてファルマシアが「ゲルろ過」の冊子をだしていて、原理や各種ゲルの特性が詳しく書かれてます。今、それを見ながら書いています。会社がGEに吸収されてしまってからもあるのかどうかわかりませんが、あったら取り寄せて一読すると良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.3026-3 - 2010/08/16 (月) 09:40:14 - ひろし stu様アドバイスありがとうございます。 マイクロコンのYM-10あたりで一度試してみます。 限外濾過は簡単そうでいいのですね。 この手の手法に不慣れでさらに見当ちがいなことを聞くかもしれませんがご容赦ください。 理想的には1-5kDaだけの分画を厳密に抽出したいですが、 限外濾過の方がゲル濾過より分取がシャープなのでしょうか？ また、目的の蛋白のアミノ酸の25％ほどが疎水性アミノ酸であるため、メンブレンや担体への非特異的吸着を気にしているのですがどちらが安全であろうとかはどうでしょうか？ どうぞよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.3026-2 - 2010/08/15 (日) 16:41:04 - stu そういう場合は普通 限外濾過だと思います。 10kDa以下を分画できる遠心用フィルターがamiconとかであります。 それとも5-10kDaだけ除いて、1-5kDaの分画は残さないといけないということになるのなら、少々厄介ですが。

5 or 10kDa以下のpeptidesの抽出 削除/引用 No.3026-1 - 2010/08/15 (日) 05:09:40 - ひろし 血清入りの培養液から5 or 10kDa以下のpeptidesのほぼすべてを抽出したいと考えています。 もっと直積的に言えば、培養上清中から5 or 10kDa以上のものだけ完全に取り除きたい（できれば未変性状態で）のです。 いろいろ探してみたのですが ゲル濾過のSephadex G-25やG50がカタログ上良さそうなのですが、 なにぶんゲル濾過の経験がありません。 上記の目的にはあうでしょうか？ 他に手段はあるでしょうか？ どうぞよろしくお願いします。

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