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(無題) 削除/引用 No.3019-5 - 2010/08/18 (水) 14:50:33 - AP 界面活性剤といっても性質の異なる種類がいっぱいあるし、そのなかから目的に適したものをいかにうまく選ぶかが重要です（と、タンパク質研究を専門にしている人たちならいうでしょう。でも私は詳しくありません）。 タンパク質精製の目的で溶菌するときは、Triton-X100やNP-40、Tween20などの非イオン性の界面活性剤が使われます。これらはタンパク質変成作用はほとんど無いか、あっても感受性のタンパク質がごく一部あるていどでしょう。たとえば、封入体などの不溶化したタンパク質をこれらの界面活性剤で変性・化溶化しようとしても、まず無理です。 一方、SDSやサルコシルなど（陰）イオン性界面活性剤は強いタンパク質変性作用があります。生物材料から核酸を精製するときヌクレアーゼを変性させるため、あるいはなにかの酵素反応をとめるとき、加えるのはこのての界面活性剤です。Triton-X100なんかはむしろ酵素反応中で酵素を失活させないために添加することもあるくらいで。 >可溶化の時間を長くした場合、当然タンパクは変性しますか？ それは界面活性剤処理のせいというより、無用に処理時間を延ばせば劣化がすすむあろうことは、なんでも同じ（酸化、温度上昇、物理的せん断力　などなど）。

(無題) 削除/引用 No.3019-4 - 2010/08/17 (火) 17:33:07 - S2000 BugbusterのＨＰを見ると、Bugbusterでは変性の心配がないと書いていますが、界面活性剤が入っているため、可溶化の時間を長くした場合、当然タンパクは変性しますか？

(無題) 削除/引用 No.3019-2 - 2010/08/13 (金) 09:35:28 - AP BugBusterという製品が出るはるかまえから、超音波やフレンチプレスを使わずに、界面活性剤等で溶菌する方法は一般的にもあって、実験書等にも載っています。BugBusterにこだわらなくてもいいのではないでしょうか。 一例として、lysozyme (1mg/mL)を加えて30分程度、次にTriton-X100またはNP-40（1% ）とDNAを断片化するためDNase（5 ug/mL）加えて30分程度（ライセートの粘性が十分なくなるまで）、4℃でスターラーまたはシェイカーで緩やかに撹拌しながら処理します。

BugBusterの組成 削除/引用 No.3019-1 - 2010/08/13 (金) 01:15:50 - S2000 私の研究室では、大腸菌で発現させたタンパクをBugBusterを用いて可溶化しています。これまでは、機能解析などを目的としてタンパクを発現精製していたのですが、このたび結晶構造解析を行うことになりました。 結晶構造解析を行うには多量のタンパクが必要なため、大量培養大量精製したいのですが、可溶化に用いているBugBusterの価格が高く、自作できないかと思いました。ちなみに研究室には超音波破砕やフレンチプレスといった機械はありません。 説明書を見ていますと、Tris bufferに界面活性剤が入っているようなのですが、もちろん詳しくは書いていません。 どなたか組成などの情報を知りませんでしょうか？よろしくお願いします。

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