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Cre loxpシステムでHomo-KOマウスを作成したい トピック削除
No.3012-TOPIC - 2010/08/11 (水) 16:13:10 - もけけ
いつも読ませていただいています。
マウス繁殖初めて半年の者です。

@Cre/loxpシステムで Conditional Knockout Mouseの繁殖を行っています。
まず、loxp配列で、目的の配列(あるタンパク分解酵素)を挟み、
Neoを除去した Homo配列のマウス作成までを終了しました。

A次に、特定部位(今回はU型コラーゲン)にCreを発現するマウスを購入する予定です。

ここで、@・Aのマウスを交配すれば、
loxp配列がKOされるのは理解できるのですが、
そもそも仔マウスはHeteroとなるわけで、Hetero-KOとなってしまうと
考えます。
他の遺伝子では、Hetero-KOの表現型がWTとあまり変わりがない
という事例も多いことから、可能なら、Homo-KOを作成したいと思っているの
ですが、その際はどのような繁殖計画を立ててゆけばよいでしょうか?

つたない言葉・内容の質問で申し訳ありません。
全く筋違いの質問であれば、それもご指摘いただけると幸いです。
 
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No.3012-6 - 2010/08/12 (木) 18:44:49 - もけけ
>774さん
ご返答ありがとうございます。

検索ワードが異なっており、下記のトピックにたどり着けていませんでした。
確かに、私の聞きたかったことについて記載がしてあります。

やはり、Conditional KO mouse が安定的に供給されるのは
難しいようですね。

Mouse A (Cre/Cre, flox/flox)
Mouse B (Wt/Wt, flox/flox)
を交配させれば、理論上は安定的に得ることが出来るようですが、
道のりも長く、別にControlを得る必要もあるので、
やはり、トピックに提示されている組み合わせでやることにします。

ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.3012-5 - 2010/08/11 (水) 22:57:59 - 774
そうでした、申し訳ないです。
Creを使っても全身でしか飛ばしたことがなかったもので、ついそのまま回答してしまいました。

以下に同様の質問がありますので、それが回答になると思います。

http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech3/biotechforum.cgi?mode=view;Code=577

(無題) 削除/引用
No.3012-4 - 2010/08/11 (水) 17:57:29 - もけけ
追記になりますが、

774さんの方法の場合は、
Conventional KO マウスには使えると思うのですが、
Conditional KO マウスには適用できず、
【部位・時間特異的にCreを発現し、KOする】
という性質が受け継がれない気がするのですがいかがでしょう?

(無題) 削除/引用
No.3012-3 - 2010/08/11 (水) 17:11:41 - もけけ
レスポンスありがとうございます。

> 純粋にloxP配列が二カ所組み込まれ、それがホモのマウスがいるということでいいのでしょうか?

⇒そうです。

> floxed/floxed × Cre
> ↓
> 全て /+
> ↓
> /+ × /+
> ↓
> /凵@, /+ , +/+
>
> 以上でどうでしょうか?

⇒ということは、安定的にHomo-KOを得るには、
/凾♂・♀ある程度得て、それらを交配させるということで
よろしいしょうか?

(無題) 削除/引用
No.3012-2 - 2010/08/11 (水) 17:00:08 - 774
純粋にloxP配列が二カ所組み込まれ、それがホモのマウスがいるということでいいのでしょうか?
なら、

floxed/floxed × Cre

全て /+

/+ × /+

/凵@, /+ , +/+

以上でどうでしょうか?
ちなみに、細かいことを言いますとloxP配列はKOされません。
最終的に一つは残ります。

Cre loxpシステムでHomo-KOマウスを作成したい 削除/引用
No.3012-1 - 2010/08/11 (水) 16:13:10 - もけけ
いつも読ませていただいています。
マウス繁殖初めて半年の者です。

@Cre/loxpシステムで Conditional Knockout Mouseの繁殖を行っています。
まず、loxp配列で、目的の配列(あるタンパク分解酵素)を挟み、
Neoを除去した Homo配列のマウス作成までを終了しました。

A次に、特定部位(今回はU型コラーゲン)にCreを発現するマウスを購入する予定です。

ここで、@・Aのマウスを交配すれば、
loxp配列がKOされるのは理解できるのですが、
そもそも仔マウスはHeteroとなるわけで、Hetero-KOとなってしまうと
考えます。
他の遺伝子では、Hetero-KOの表現型がWTとあまり変わりがない
という事例も多いことから、可能なら、Homo-KOを作成したいと思っているの
ですが、その際はどのような繁殖計画を立ててゆけばよいでしょうか?

つたない言葉・内容の質問で申し訳ありません。
全く筋違いの質問であれば、それもご指摘いただけると幸いです。

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