固定後、翌日まで保存ならamiさんの仰るように、「洗浄後」に保存すべきです。手元にあるBDのCytofix/Cytopermのマニュアル(もっとも僕は自作のもを好みますが)には、4%PFAで固定後、2回washして72時間までは4℃で保存できるよと、あります。
>やはり確認した方がよさそうでしょうか?
問題点の絞り込みのために、自分なら迷わずCD69での活性化は確認します(予備実験で。サンプル数が多いのなら尚更です)。CD4のinternalizationとCD69との相関がどれほどかは知らないのですが、少なくともCD69で活性化が確認できていれば、ICSもうまく行くのを経験的に体験してます(ヒト)。この可能性が除外出来たら、抗体(IL-4, IFN-g)の品質ですかね。IFN-gなんかは、比較的容易に検出しやすい印象ですが。
余談ですが、ネガコンは、BFAのみを加えたサンプルだと思うのですが、こういうmixされたready-made試薬の場合、どうするんでしょうね。 |
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