>[Re:1] GREENさんは書きました :
> よろしくお願いします。
>
> 遺伝子AのファミリーA1, A2, A3をすべてfloxしたマウスと組織特異的Creマウスを交配させてトリプルKOマウスを作りました。3遺伝子はすべて異なる染色体上です。
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> A1のシングルKOでは十分（mRNAレベルで90%前後）に対象細胞でA1が飛んでいたのですが、トリプルではA1A2A3が満足にKOされてくれません。せいぜいmRNAで20-30%程度の低下です。
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> DNAをチェックすると凾ﾌバンドとfloxのバンドが同程度に両方見えます。シングルKOではfloxのバンドはかなり薄かったので、トリプルにすることでCre活性が相対的に不足してしまうのかと考えたのですが、そのような可能性はあるでしょうか。
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> もしそうなら、現在用いているCre(+/-)のマウスをCre(+/+)にすることで改善する可能性はあるのでしょうか？
A1, A2, A3が転写制御因子でCreの発現に影響を与えている可能性。
そう出なければ、単純にselectionがかかったんじゃないでしょうか。遺伝子Aが分化や増殖に必要で、一つだけつぶしたときにはredundencyで何とかなっていたものが、全部つぶしたから、切れ残りの細胞だけが生き残ったって感じでしょうか。そもそもシングルノックアウトで90%程度しか切れないのであれば用意に予測できる事態だと思います。 |
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