Bio Technical フォーラム

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昆虫細胞へのトランスフェクション トピック削除
No.2952-TOPIC - 2010/07/28 (水) 18:23:43 - アザラシ
昆虫細胞発現系を構築しようとしています。

そこでトランスフェクションを行う時に用いるプラスミドの精製度はどれ位必要なのでしょうか。


キットのプロトコールには塩化セシウム密度勾配遠心で精製すると書いてあるのですが、これはプラスミド抽出を自作で行った場合するのでしょうか。抽出をカラムキットを用いて行った場合、CsCl密度勾配遠心法は行わなくても十分な精製度が得られるものなのでしょうか。
　
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(無題) 削除/引用
No.2952-3 - 2010/07/29 (木) 13:13:36 - アザラシ
g-ajさん

有難うございました。

(無題) 削除/引用
No.2952-2 - 2010/07/28 (水) 19:47:29 - g-aj
例えばQIAGENのPlasmid Midi Kitでは以下の様な記述があります。

QIAGEN-tip 中の非常にユニークな陰イオン交換樹脂は核酸精製を目的として開発されました。本製品の優れた核酸分離能力により、CsCl 密度勾配遠心分離法を2回行って得たDNAの純度に匹敵、あるいはそれ以上の純度のDNAが調製されます。

メジャーなメーカーのMidi以上のスケールのキットを使えば、基本的にトランスフェクションで精製度が問題になることはないと思います。

昆虫細胞へのトランスフェクション 削除/引用
No.2952-1 - 2010/07/28 (水) 18:23:43 - アザラシ
昆虫細胞発現系を構築しようとしています。

そこでトランスフェクションを行う時に用いるプラスミドの精製度はどれ位必要なのでしょうか。


キットのプロトコールには塩化セシウム密度勾配遠心で精製すると書いてあるのですが、これはプラスミド抽出を自作で行った場合するのでしょうか。抽出をカラムキットを用いて行った場合、CsCl密度勾配遠心法は行わなくても十分な精製度が得られるものなのでしょうか。
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