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(無題) 削除/引用 No.2929-12 - 2010/08/31 (火) 22:14:19 - み >[Re:1] DsRed ?さんは書きました : > 今回私の研究で、FACSだけでなく、共焦点で興味ある分子の細胞膜上での局在を調べることになりました。予想通り、PE (phycoerythrin) 標識の２次抗体を使用してその局在を共焦点で見るともの凄い早さで退色してしまいました。 質問に対するダイレクトなコメントではないのですが： FACS用のPE標識抗体では確かに蛍光は弱いですが、 AntifadeでマウントしておけばPEでもしばらく共焦点観察・撮影できていますがいかがですか？

QD は勧められない 削除/引用 No.2929-11 - 2010/08/31 (火) 21:29:04 - む Quantum dot は、私は勧められないと考えます。 Quantum dot の蛍光特性は、共焦点／蛍光顕微鏡に一般的に備わっている フィルターセットを鑑みると、明らかに逸脱します。 何も言わなければ、DAPI / FITC / Cy3 / Cy5 等がかぶりなく観察可能な フィルターセットで納品されるのがほとんどでしょう。 勿論、よっぽど凝った人がセットアップしたのであれば別ですが。 共焦点はフィルターを観察時に動的に変更出来る機種もありますが、 通常のユーザーはあまり気にもしない 言ってみれば応用編といった使い方でしょうし、 蛍光を目で観察出来ないのでは常用出来ません。 また、当然価格面でも相当不利です。 今回の場合は Qdot 585 か 605 が使えると思いますが、 200uL で 60,900 円です。高すぎる．．． Alexa 568 ラベル抗体では、highly cross-absorbed のもので 500uL で 42,100 円 程度です。 単純比較は出来ないにしても、価格差は明らかです。 マニア的な解決法であってもいいけどという事であれば、 Quantum dot は選択肢の一つになり得るでしょう。 ただ、通常のセットアップで FACS および共焦点レーザー顕微鏡で常用出来、 なおかつ価格の高くない色素（/ラベル抗体）は存在しない、という事です。

(無題) 削除/引用 No.2929-10 - 2010/08/31 (火) 12:45:34 - 通りがかり > トピ主さんの要求を満たす色素は、まず存在しない 先にも書きましたけど、Quantum Dot なら Blue Laser 励起で赤の蛍光を取り出すということは普通にできますよ。ま、価格面でトピ主さんの要求を満たさないかもしれませんが。

ないですね 削除/引用 No.2929-9 - 2010/08/31 (火) 12:35:57 - む お使いになるFACSがGreen/Yellow laserを積んでいない限りは、まず無理でしょう。 一般にFACSは少なくともBlue laerは積んでいます。 Blue laserではFITCやPEが使えますね。 次に積むとしたら、普通はRed laserだと思われます。 Red laserはAPCやAlexa 647等が使用出来ます。 その次といえば、用途にもよりますが、Violet laserかUV laserになると思われます。 Violet laserでは、Pacific Blueや最近だとBDのHorizon V450とかでしょうか。 UV laserは特殊な用途で、特定の幹細胞に関連するSP細胞を見る時に必要となります。 GreenやYellow laserを積むのは、仕様としては結構変態に近い部類です。 トピ主さんの使用されるFACSがGreen/Yellow laserを積んでいるとは、普通には考えにくいですね。 TdTomatoなどは蛍光が強いのでBlue laserでも叩く事が出来る場合があると聞きましたが、 TdTomato標識の二次抗体なんて、売っているとは思えません。 自分で作る以外ないでしょう。 自分で作るとなると、当然お金は相応にかかります。 また、当然かなりの蛍光強度の為他の色素にかぶってきますから、 compensationを考えるとちょっと使いづらいですね。 以上の事から、トピ主さんの要求を満たす色素は、まず存在しないという結論になるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.2929-8 - 2010/07/26 (月) 08:12:39 - う どなたかも書いていらっしゃいますが、FACSと顕微鏡が どのようなフィルターを装備しているのか？（励起光とか） これがわからなければ、どんな蛍光物質が使用可能かわかりませんし、 逆に、それがわかればその中で使える蛍光物質がわかり、 その中で、どれが比較的強い蛍光を保持できるかいうことができます。 http://www.bdbiosciences.com/external_files/media/spectrumviewer/index.jsp これとか使って。

(無題) 削除/引用 No.2929-7 - 2010/07/25 (日) 20:50:17 - MBB 経済的に苦しいラボでQDはちょっと無理なのでは？

(無題) 削除/引用 No.2929-6 - 2010/07/24 (土) 16:15:39 - 通りがかり Quantum Dot は？ 単一励起波長で様々な色の蛍光が出ますよ。

カタログというものがこの世の中には存在して 削除/引用 No.2929-5 - 2010/07/24 (土) 13:37:36 - TS なにより、カタログを調べれば、すぐにわかることだと思います。 いろいろ親切に書いてあると思うんですけど。

(無題) 削除/引用 No.2929-4 - 2010/07/24 (土) 13:25:42 - フィルター 使用するFACSと共焦点顕微鏡それぞれに どのような励起波長と蛍光波長のフィルターがセットされているか分からないことには、 みなさんがお答えできないと思うのですが・・・

(無題) 削除/引用 No.2929-3 - 2010/07/24 (土) 12:04:34 - DsRed+? ああああ様 >Alexa Fluorは免疫染色だけでなく、FACSにも使えますよ。 ありがとうございます。しかし、 Alexa488以外の多くはFACSレーザーの488nmの波長では励起されないですよね。 そのため赤色のAlexa546やAlexa555やAlexa568などはFACSには使えないかと思います。 FACSと共焦点とで別々の抗体を購入した方がいいでしょうか。。 引き続き、ご存知の方どうぞ宜しくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.2929-2 - 2010/07/24 (土) 01:54:23 - ああああ Alexa Fluorは免疫染色だけでなく、FACSにも使えますよ。

共焦点でもFACSでも使用できる赤色蛍光色素を教えてください。 削除/引用 No.2929-1 - 2010/07/23 (金) 22:56:13 - DsRed ? みなさまお世話になります。 いつも拝見させていただいております。 ひとつお聞きしたい事があります。 FITCやGFPなどの蛍光タンパク質は共焦点でもFACSでも使用できます。 FITCは退色しやすいので、Alexa488などが好んで共焦点で使用されるかと思います。 今回私の研究で、FACSだけでなく、共焦点で興味ある分子の細胞膜上での局在を調べることになりました。予想通り、PE (phycoerythrin) 標識の２次抗体を使用してその局在を共焦点で見るともの凄い早さで退色してしまいました。 そこで、みなさまにお聞きします。 経済的に厳しいlabですので、共焦点でのみ使える赤色蛍光標識２次抗体（Alexa555やAlexa568など）ではなく、FACSにも使用できる赤色２次抗体を探しています。 どうか、みなさまの豊富な経験により裏付けられたご意見をお聞かせいただけないでしょうか？ どうぞよろしくおねがいします。

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