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(無題) 削除/引用 No.2877-7 - 2010/07/13 (火) 22:29:46 - 名無し サンプルが陽極側に流れないということは上に上がって陰極側のほうに行ってしまうという事ですか。あるいはウェルのなかでそのままということですか。試料にはBPBが入っていると思うので試料の移動の様子が分かると思うので、通電後の状態を具体的に説明いただけますでしょうか。 一応可能性ありそうなことは以下の通り。 1. 電圧の目盛りのレンジの切り替えがあるものだと低い方になってませんか。150Vのつもりが15Vとか。 2. bufferやgelのpHがとんでもなくずれてるor間違えている。(実際は少しぐらいずれてもちゃんと流れるので、異常が見えるとすれば1~2pH単位以上のズレ） 3. sampleにグリセロールなど比重をつけて沈めるようなものを入れてない。など使用しているSDS-sample buffer(試料可溶化液）の組成を間違えている。 4. パワーサプライまたは泳動そうの故障、異常。あるいは誤った方法で使っている。パワーサプライは素人が触ると危険なので、点検修理はメーカーのほうでみてもらって下さい。

(無題) 削除/引用 No.2877-6 - 2010/07/13 (火) 17:38:28 - ？ 何をもって「流れない」と言っているのでしょうか？ マーカーを流してみたり，やったのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2877-5 - 2010/07/13 (火) 16:56:40 - ああああ タンパク量は10ugということなので、普通だと思います。 泳動されないというのはどういうことですか？ ゲルをCBBか何かで染めても、染色されないということですか？ サンプルは何ですか？

(無題) 削除/引用 No.2877-4 - 2010/07/13 (火) 16:45:17 - ぱげ ＞ああああさん、よっしーさん 早速回答、有難うございます。 気泡は確認されました。 タンパクは1000ng／μlで流しています。 その他バッファー類は市販のバイオ研究参考書の組成を参考にして作成しています。詠動条件は100〜150Vで、1.5hです。

(無題) 削除/引用 No.2877-3 - 2010/07/13 (火) 16:40:52 - よっしー 電気をながしたときに，泡が出ますか． 出ていれば電気は流れています． マーカーはきれいに流れていますか？ 流れていれば，サンプルの問題でしょう． 流れていなければ，陽極と陰極，逆に流していませんか？ タンパク量が多すぎても泳動が汚くなることがあっても，全く流れないことはないと思いますが・・・ 3の量はミニゲルならそんなもんじゃないですか． 一度でもやった事があれば，これくらいはわかると思うのですが． 知人あるいは上司，先生に教えてもらってください．

(無題) 削除/引用 No.2877-2 - 2010/07/13 (火) 16:40:26 - ああああ どういうことですか？詳しい情報がないと何も言えません。 ゲルの組成は合ってますか？ サンプルバッファーの組成は合ってますか？ ランニングバッファーの組成は合ってますか？ サンプルバッファーにBPBを入れてると思いますが、BPBも泳動されないのでしょうか？ タンパク量はどのくらい使用しているのでしょうか？ 泳動装置の白金線から気泡は出ていますか？ 泳動条件はどのような条件ですか(定電圧、定電流など)？

SDS-PAGEでサンプルが流れない 削除/引用 No.2877-1 - 2010/07/13 (火) 16:26:07 - ぱげ SDS-PAGEにてタンパクの電気泳動を試みたのですが、サンプルが陽極流れてくれません。 �@電源機器に不備 �Aタンパク濃度が濃すぎる �Bサンプル量が多い（10μl／1lane） など、やったことがある知人に聞くと言われたのですが、そう言える理由がよく解かりません。教えてください。聞くと『ウチでは〜してる、〜してる』と、曖昧にされたので…。 また、その他に原因がある、と思われる方も、是非回答をお聞かせ下さい。 よろしくお願いします。

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