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(無題) 削除/引用 No.2745-3 - 2010/06/19 (土) 01:10:32 - in situ おそらく市販のin vitro transcriptionのキットにはRNase inhibitorが付属しているか、酵素液の中に添加されていると思います。 ですから、酵素的な分解はこれによって防がれているのだと思います。 物理的な分解に関してですが、Rocheのin vitro transcriptionのキットには『2時間以上のincubationは収量を逆に低下させます』とかかれていたりするので、6時間はやりすぎかもしれません。 『うまくいかない』とのことですが、収量が低いのでしょうか？ それとも全長のものができない？ 使われているキット、酵素、プロモーター配列を書いていただければ改善点を指摘できるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2745-2 - 2010/06/18 (金) 19:57:13 - あかね 反応系にRNaseがコンタミしていなければ、O/Nで反応しても分解されません。 細胞から抽出したRNAも同様です。

in vitro転写系の原理 削除/引用 No.2745-1 - 2010/06/18 (金) 19:40:12 - ngkkk ウイルス実験のヒヨっコです。 in vitro転写系の37℃の転写反応において、多くの注意書きによると 「反応時間を延ばせば転写量が増えることもある」 のだそうですが、その間に転写されたRNAが分解していってしまうことはないのでしょうか？それとも転写されるRNA量の方が多いので差し引きプラスとなるのでしょうか？一般的なRNAは室温だともちろん分解されますよね？ なかなか転写がうまくいかないのでプロトコール通り1時間で行うのが吉なのか、それとも思い切って6時間まで延ばしてしまうのが吉なのか。 どなたか説明がつく方はご好意で教えて頂けると幸いです。

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