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pSMARTやpBLUESCRIPTに関して トピック削除
No.2736-TOPIC - 2010/06/16 (水) 23:30:31 - allen
いつもお世話になってます。

 サブクローニングしようと思っていますが、pSMARTとpBLUESCRIPT、どちらを選ぶかがわかりません。

 判断基準などについて、詳しい方に教えていただきたいです。
 
両方のメリット、デメリットはなんでしょうか。どちらが常用で、使いやすいでしょうか。
 
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No.2736-8 - 2010/06/18 (金) 16:13:08 - allen
みなさん、ありがとうございます。大変参考になりました!

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No.2736-7 - 2010/06/17 (木) 12:00:08 - ats
サブクローニングしたあと、何にしたいかによっても選択肢は変わってきます。これら以外のベクターの方がその後の手間が大幅に省けることもあります。

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No.2736-6 - 2010/06/17 (木) 11:56:18 - ats
朝一番さんのコメントが全てで自分で納得のいくまで調べるべきですが、参考程度に補足してみました。
pBluescriptは、選べる制限酵素サイトが多いのと、カラーセレクション(青白)が可能です。カラーセレクションするときには、インサートも転写・翻訳されますので、配列によってはクローン化できないものもあります。カラーセレクションの意味・原理はご自分で調べてください。
シークエンス用primerも汎用のものが使えるのも利点です。
pSMARTの説明書には"Transcriptional terminators border the cloning site to prevent transcription from the insert into the vector."と書いてありますので、インサート配列の影響を受けにくいようです。また、pSMARTシリーズにはrop遺伝子が組み込まれた比較的低コピー(20-40 copies/cells)のベクターも用意されていますね。これもpBluescriptのような多コピーベクター(200-500copies/cells)では、クローン化されにくいインサートには有効です。
カナマイシン耐性遺伝子のものもクローン化されにくい(plasmidが脱落しやすい)インサートには有効です。
ただし、pBluescriptより使える制限酵素は少ないですね。
両方使ってみては?

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No.2736-5 - 2010/06/17 (木) 11:45:27 - R
朝一番様のメッセージに従って製品説明書とか調べられましたか?

その結果何が分かりましたか?
説明書等を参考にしても何も理解できなかったのですか?

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No.2736-4 - 2010/06/17 (木) 11:45:17 - ばいや
なぜこの2種類しか選択できないの?

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No.2736-3 - 2010/06/17 (木) 11:34:13 - allen
 
 ご回答ありがとうございます。

 サブクローニングするために、ベクターを決めたいですが、選択できるのが
pSMARTとpBluescriptで、しかし、この二種の区別が良くわけりませんので、教えてください

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No.2736-2 - 2010/06/17 (木) 06:26:44 - 朝一番
質問の意図が良く分かりませんが、特別な性質のない遺伝子の単なるクローニングベクターとして使うのであれば何でもいいです。MCSの制限酵素サイトで好みに応じて使い分ける程度でしょうか。
キット化されたものの特徴についてはメーカーカタログ・HPを参考にすればとしか答えようがありません。

pSMARTやpBLUESCRIPTに関して 削除/引用
No.2736-1 - 2010/06/16 (水) 23:30:31 - allen
いつもお世話になってます。

 サブクローニングしようと思っていますが、pSMARTとpBLUESCRIPT、どちらを選ぶかがわかりません。

 判断基準などについて、詳しい方に教えていただきたいです。
 
両方のメリット、デメリットはなんでしょうか。どちらが常用で、使いやすいでしょうか。

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