全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.2685-3 - 2010/06/07 (月) 11:30:13 - au 返信ありがとうございます。助かります。 1) culture mediaは何をお使いでしょうか？ →メディウムはMEM-アルファ、10%FCS、1%の抗生剤（Pen + Strep）です。 2) FBS はロットチェックされてますでしょうか？ →確認しましたが、ロットは問題ないです。 3) plating時の細胞密度はどれくらいでしょうか？ 24wellでは1.0*10^5cells/well、96wellでは1.0*10^4cells/wellで撒いています。 4) 他の細胞、たとえばRAW264.7などでは破骨細胞形成は確認できておりますでしょうか？ →申し訳ないですが、cell lineでは確認していません。 マウスから大腿骨採取してプレートに撒き終わるまでの時間としては1時間強くらいだと思います。スピードが関係しているのでしょうか。RANKLはcultureの始めから混ぜていたほうが良いのですかね？複数の論文のmaterial methodを読んでみても、そんなに難しくなさそうに書いてはあるのですが…。 もう少しがんばってみます。

(無題) 削除/引用 No.2685-2 - 2010/06/05 (土) 03:06:40 - Hiro au 様、 いくつかau様の実験条件について質問させてください。 1) culture mediaは何をお使いでしょうか？ RPMIだと破骨細胞形成はうまくいきにくいと聞いたことがあります。 　　よく使われているのはalpha-MEM +10%FBSではないでしょうか。 2) FBS はロットチェックされてますでしょうか？ 　　ロットによっておなじsRANKL濃度でRAW264.7 を刺激してもかなり破骨細胞形成に違いがありました(形成にかかる日数・形成された数) 3) plating時の細胞密度はどれくらいでしょうか？ 4) 他の細胞、たとえばRAW264.7などでは破骨細胞形成は確認できておりますでしょうか？ 　　 au様の質問への回答ですが、下記の通りです。 (1) 赤血球成分除去操作はおこなっておりません (2) M-CSFをいれてしばらくするとマクロファージのようなfibroblastのような紡錘形っぽい付着細胞が確認されます。 以上、参考になれば幸いです。

マウスの破骨細胞分化について 削除/引用 No.2685-1 - 2010/06/04 (金) 18:57:18 - au マウスの骨髄細胞から破骨細胞に分化させようと試みているのですが、なかなかうまくいきません。 現在行っている方法は、 マウスの大腿骨から骨髄を採取し、メディウムにいれ、遠心をかけた後、wellにまくという単純なものです。それに、day0でM-CSFを20ng/ml加え、3日後にメディウムチェンジし、M-CSFとRANKL 100ng/mlを加え、7日後に評価です。 マウスはBlack6です。 破骨細胞が少しできるのですが、数がかなり少なく（24wellで30個程度）話になりません。 �@溶血試薬による赤血球成分除去操作は必要でしょうか。 �Aday0で、M-CSFを入れた後、wellを見てもコロニーが形成されないのですがマウスの場合はそれが正常なのでしょうか。 お気づきの点があれば、ぜひ教えてください。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---