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(無題) 削除/引用 No.2669-5 - 2010/06/03 (木) 10:52:24 - DNase Pumpkin様、Tb様ありがとうございます。 Pumpkin様 ＞ただ、これはお探しのRT-kitではないですよ、DNase処理キットです。 そうですね。ただ現在保有しているSuperscriptIIIを使い続けられるので、実験条件の変更をせずに済むのは、助かります。 Tb様 私が探していたＲＴキットの条件そのままです。ただ現在20ulあたり1ugのＲＮＡで反応しているので、上限ぎりぎりになります（SSIIIは上限5ugまでです)。今使用中のＲＴ後にcDNAの精製処理を行ってからＰＣＲを行ったところプライマーダイマー、増幅産物どちらも増加したことから、ＲＮＡを含むSSIIIのRT溶液にはプライマーのアニーリングを阻害する何かが入っているようです。カラム精製すれば、反応液中のＲＮＡ濃度が多少変わっても問題ありません。コピー数の少ない遺伝子でやってみたところ良好な結果だったのですが、ＲＴ後ルーチンでカラム精製をするかどうかはまだ決めてません。

(無題) 削除/引用 No.2669-4 - 2010/06/02 (水) 23:31:44 - Tb Abgene/ThermoのVerso cDNA kitはRT反応中に2本鎖DNAを切断するRT Enhancerなるものが入っています。普通にワークしてますし、RTaseも57℃までできるとあるので、高次構造をもつmNRAにも向くとは思います。でも、比較対象がSuperScriptIIIとなるとどうかな・・・？　　参考程度に。 http://www.abgene.com/downloads/AB-1453-v6-1107.pdf

(無題) 削除/引用 No.2669-3 - 2010/06/02 (水) 15:40:18 - Pumpkin TURBO DNA-free kitをルーチンで使ってます。このキットはDNaseの失活に熱処理やフェノール処理をせず、遠心操作だけですのでRNAの非酵素的分解の防止に効果的になってます。また、DNA結合能を高めたDNaseとうたっています。これまで、DNase処理-RTで遺伝子増幅が認められたことはありません。ただ、これはお探しのRT-kitではないですよ、DNase処理キットです。 うちは、QIAGEN RNeasy+TURBO DNase Free+PrimeScriptII 1st strand cDNA synthesis kitという組み合わせです。InvitrogenのSuperscriptIIIは非常にいいのですがちょっと高価なので、次点ということになるとこのTaKaRaの酵素だと思っています。あくまでご参考ということで。

よく探してみると 削除/引用 No.2669-2 - 2010/06/02 (水) 12:44:01 - DNase TURBO DNA-free™がAMBIONから販売されていました。プロトコールを見る限りRT直前の反応に向いてそうです。これとSupersCriptIIIを合わせて使おうと考えていますが、TURBO DNA-free™を使った方いましたら、ご感想を教えてください。

DNase処理を含んだＲＴkit 削除/引用 No.2669-1 - 2010/06/02 (水) 11:43:25 - DNase DNase処理を含んだＲＴkitを探しています。サンプルが希少なためと、抽出した際に行おうとした実験ではgenomic DNAの混入が問題にならなかったため、RNA抽出時にはゲノムDNAの除去を行っていませんでした。私が知っているのはQiagenのDNA wipeout bufferを含んだＲＴキットですが、何回かINVITROGENのSuperscriptIIIに比べた結果、自分たちの目的遺伝子に関しては特異性と効率で劣った結果が出ました。Qiagenのkit以外にDNase処理を含んだキットがありましたら教えていただけないでしょうか？

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