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＞~さんありがとうございます 削除/引用 No.2660-3 - 2010/06/01 (火) 00:24:42 - サイバー 早速のご回答恐縮でございます。 実はtransgenic miceを作製するにあたり、過去の論文の追試を行おうと 考えているのですが、論文のものと同じBAC cloneは既に販売されておりま せん。 その論文では36kbp程度の目的のgene fragmentの両側にもともとある 2ヶ所のSwa�T siteで切り出してTg miceを作製しているのですが（BAC cloneそのままの打ち込みではうまくいかなかったようです）、今手元 にあるBAC cloneでは同じ制限酵素siteが他部位にあり、切り出された他のsegmentが目的のfragmentとほぼ同長となってしまうため、このサイト（約50kbp）を抗生剤カセット等にそのまま置き換えてcounter selectionでそのままdeletionしてしまおうと考えています。 ちなみにご教授頂いたrecombination protocol #3を踏襲してconstruct作製を行っております。 通常のBAC protocolではirregularなことなのかもしれません・・・。 どうもありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.2660-2 - 2010/05/31 (月) 22:02:45 - ~ そんなにホモロジーアームはいらないのでは？ http://genome.med.yale.edu/images/8/86/BAC_Protocol3_SW102_galK_v2.pdf 少なくともこちらであれば、うまくいったことがあります。 http://www.springerlink.com/content/5724x82418139845/

SW102でのhomologous recombination 削除/引用 No.2660-1 - 2010/05/31 (月) 21:21:19 - サイバー 教えて頂きたいのですが、今、SW102へtransferしたBAC DNAのうち、 homologous recombinationを用いて50kbp程度のrecombinationを起こそうと 考えています（homology arm自体は3〜4kbpです）。 実際このようなcounter selectionは可能なのでしょうか。 ご経験等ございましたらご教授頂けましたら幸いです。

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