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(無題) 削除/引用 No.2647-4 - 2010/05/31 (月) 11:41:33 - ats T-RExもリーキーで、「良い」クローンを選ぶ必要があります。 積極的にoff制御するシステムが良いのではないかと思っています。 具体的には、Tet-ON Advanced (rTA3)+tTSでしょうか。 レポーターベクターをinsulatorで挟めば良いのかな？

使用したことはありませんが・・・。 削除/引用 No.2647-3 - 2010/05/29 (土) 23:22:18 - ophites ClontechのProteoTuner↓は一つのベクターでタンパク量を制御できるので、co-transfectionをする必要が無かったはずです。（発現制御とは少し違いますが） http://catalog.takara-bio.co.jp/clontech/product/basic_info.asp?catcd=B1000592&subcatcd=B1000624&unitid=U100006010 実を言うと私も自分では使用したことがなく、抑制状態でのリーキーを可能な限り抑えられる発現制御(あるいはタンパク量制御)システムを探しています。 上記のProteoTunerの他に同じくClontechのTet-OnやInvitrogenのT-RExなどを候補に入れています。 横入りしてしまう形になって県民様には申し訳ありませんが、これはリーキーな発現が低いのでオススメ、あるいは逆にこれはやめておいた方が良い、というのがあれば、教えて頂ければ幸いです。

(無題) 削除/引用 No.2647-2 - 2010/05/28 (金) 16:16:56 - masa GeneswitchシステムとクロンテックのTet-off Advancedシステムを使用した事があります。 co-transfectionからの薬剤選抜でも樹立可能ですが、両方の遺伝子のコピー数のバランスが適切でないとリーキーな発現や、弱い誘導しかしない場合があるのでチェックするクローン数を多めに取る必要があります。 どちらの系でも上手く行く時と駄目な場合があると感じました。

動物細胞での遺伝子発現　完全抑制から誘導する系はどれが良い？ 削除/引用 No.2647-1 - 2010/05/28 (金) 14:19:22 - 県民 動物細胞内で毒性のあるタンパク質の発現を考えています。 遺伝子の発現抑制状態から薬剤で誘導の出来るベクター系が各社から出ていますが、 どれも高価な上に本当に上手く働くのか不安です。 基本的にはベクターを2種類使うようですね。 私の利用方法は、目的タンパク質遺伝子を組込んだ第１のベクターと、 その遺伝子発現を調節するための第2のベクターとのco-transfectionを行い、 形質転換細胞のセレクションをし、その後発現誘導になると思います。 論文では第2のベクターが既にゲノムに組込まれた細胞を使っている例が多いですが、 "co-transfectionでも上手く行っている方（論文）"はいますか。 ベクター系は、InvitrogenのGeneSwitchシステムが2つのプラスミドに それぞれ抗生物質耐性遺伝子が載っていて、有望かなと思っています。 アドバイス、宜しくお願いいたします。

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