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(無題) 削除/引用 No.2632-5 - 2010/05/31 (月) 14:29:22 - ｓ 去年卒論でバイサルファイトシークエンスを行っていたもの です そこでのPCRプロトコールを書きます ・PolymeraseはAmpli-Taq、Ex-Taqを用いて行っていた ExTaqは最初のライブラリからのPCR AMpli-taqはコロニーPCR ・同じ条件でPCRにかけても増える時と増えない時がある バイサルファイト処理でいがたとなるDNAが壊れているのかも なのでどうしても出ない時はバイサルファイト処理を少し短くするという手もありました

(無題) 削除/引用 No.2632-4 - 2010/05/28 (金) 08:50:00 - isa バイサルPCRにかぎらず、アニーリング温度ふったりとかは行って見られました？ あと、バイサル反応はかならずうまくいっていますか？primerがバイサル反応がうまくいかないと、かかってこないようなprimerでしょうか？

ありがとうございます 削除/引用 No.2632-3 - 2010/05/27 (木) 13:35:08 - 初心者 ‘けい’さん書き込みありがとうございます！！ さっそく試してみます。

(無題) 削除/引用 No.2632-2 - 2010/05/26 (水) 10:03:17 - けい 私も門外漢なもので詳しいことは分かりませんが、先ほどタカラバイオのエピジェネティクス特集を見ていたら、偶然にも「バイサルファイト処理したDNAにはウラシルが含まれており、α型のDNAポリメラーゼでは効率よく増幅することができません」という文章を見つけました。 http://catalog.takara-bio.co.jp/PDFFiles/58_02-08.pdf　の６ページ目。 KODはα型のDNAポリメラーゼだと思うので、PolＩ型のTaqなどで増幅してみてはいかがでしょうか？

メチル化解析 PCR条件 削除/引用 No.2632-1 - 2010/05/25 (火) 20:18:39 - 初心者 いつもお世話になっています。 4月からＨＰＶのメチル化解析の実験をしております。 論文に出ているプライマーを用いてＰＣＲをかけたのですがかかりません。。bisulfiteはzymo社のDNA methylation gold kitを使用し、ＰＣＲはアニーリング55度、35〜40サイクルで行いました。ＰＣＲキットは東洋紡のKOD plus ver2を使用しました。 メチル化をかじったことのある研究者がＰＣＲの際にあるテクニックが必要になるとの情報をききました（メチル化を実験している研究者には常識的なことらしいです）。 もしご存知の方いらっしゃったら是非教えてください！！ よろしくお願いします。

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