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(無題) 削除/引用 No.261-6 - 2009/04/01 (水) 17:29:24 - さいころ みなさまありがとうございます。 皆様のおっしゃる通り、うまくいかない理由はいろいろ考えられるということなので、 とりあえず類似タンパクの性質についてもう一度よく調べてみます。 手に入れば類似タンパクをポジコンにすることも可能ですよね。 考えられる可能性について地道に調べていきたいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.261-5 - 2009/04/01 (水) 13:53:42 - み 大腸菌のリコンビナント蛋白で活性がでるかの判断もできません。 Co-factorの必要性も考慮しなくても良いのか？ SDS-PAGEでバンドがあることは確認されているようですが、intactかどうかは不明。 大腸菌由来の他の蛋白が反応の邪魔をしていないのか？ 上手く行かなかった理由はいくらでも考えられる。

(無題) 削除/引用 No.261-4 - 2009/04/01 (水) 13:38:07 - 中年 ケース・バイ・ケースなのでここで尋ねても正解は分かりませんよ。手抜きをしないで精製してみる他ないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.261-3 - 2009/04/01 (水) 13:28:12 - ~ ポジコン用に活性があることが分かっている精製品などは手に入りませんか？ １．配列がおかしい 　（発現ベクターの配列がおかしくなっている） ２．立体構造がおかしい 　（コントロールとnative pageなどで分かるかも？） ３．夾雑物により酵素活性が阻害されている 　（コントロールが測れているのでしたら、これが疑わしい？） ４．酵素活性の測り方が間違っている 　（コントロールが測れていないのに、測定がうまくいっているとはいえないでしょう） ２以降の場合は、コントロールが無ければ調べられないと思いますが。

(無題) 削除/引用 No.261-2 - 2009/04/01 (水) 13:14:12 - ｐｐｐ 調整に問題があるのかもしれませんし、 保存に問題があるのかもしれませんし、 よくわかりませんね。 蛋白の性質とか、類似蛋白の性質とかと 相談するのがいいと思います。

酵素の活性 削除/引用 No.261-1 - 2009/04/01 (水) 11:49:30 - さいころ 酵素の活性について質問させていただきます。 ある酵素を大腸菌を用いて発現させました。SDS-PAGEでは目的のものがあることは確認できています。 通常、本などを見るとその後精製を行っているのですが、実際に酵素として働きさえすればよいと考え、精製を行わずに反応させてみましが、うまくいきません。原因が精製を行わなかったところにあるのか、また別のところにあるのか悩んでいます。 やはり夾雑物が多い状態酵素の働きが抑制されてしまうのでしょうか？ 素人で申し訳ありませんがよろしくお願いいたします。

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