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組織固定 トピック削除
No.2590-TOPIC - 2010/05/19 (水) 16:30:20 - andy
以前E18.5の胎児をPFAで固定し、切片を作成しようとしたのですが、骨がうまく切ることができませんでした。
たぶんうまく固定されていなかったためだと思うのですが、ボロボロになってしまいました。
そこで質問です。
聞いた話なのですが、E18.5の胎児をPFAに入れて固定する際に、頭がどこかに小さな穴を開けるとPFAが浸透しやすいというのは本当なのでしょうか?
また、胎児を二つに割って浸透しやすくするという事も聞いたのですが、その場合臓器がバラバラになってしまったり、変性してしまわないのでしょうか?よろしくお願いします。
 
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No.2590-8 - 2010/05/21 (金) 17:11:22 - 千
パラフィンブロックはしっかり脱水ができていなければなりませんが、薄切時には湿度を与えてやると上手く切れるのです。

ブロックにミストを吹きかける、専用の標本ブロック加湿器なるものもサクラファインテックから出ていますよ。

ぜいたく品だと思っているのでもっぱら人力で頑張っていますが(笑)


それと、うろ覚えですが、薄切面に張り付けてスライスすると、美しい切片が簡単にとれるシートも商品化されていたと思います。

どうしてもキレイな切片が得られなければ、試してみるのもいいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.2590-7 - 2010/05/21 (金) 15:45:39 - andy
>[Re:6] 千さんへ

横隔膜で内臓を保つという事ですね!

パラフィンが乾燥した状態のが良いのかと思っていました。。

とても参考になりました!!来週に行う予定なので、参考にさせて頂きなが

らいろいろ試してみます。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2590-6 - 2010/05/21 (金) 13:10:08 - 千
横隔膜があれば、腹腔内の組織は保たれています。


脱灰ができていても、骨はキレイに薄切しにくい組織だと思います。

パラフィンブロックを適度に冷やし、薄切面に息を吹きかけたり、水にひたした厚紙(私はキムワイプの空き箱を短冊形に切って使っています)で薄切面を軽くなでてぬらしてから薄切するといいです。


こういった、コツなどは言葉で説明するのは難しいですね(^^;)

近くに病理の得意なテクニシャンがいらっしゃれば、直接教えてもらうのがベストではありますが・・・。

(無題) 削除/引用
No.2590-5 - 2010/05/21 (金) 12:47:22 - andy
> 4%PFAで一晩固定
>   ↓
> 軽く水洗して脱灰液(10%クエン酸Na,22.5%ギ酸)に一晩
>   ↓
> 再び軽く水洗

というところまで同じです。

今回はエタノール、キシレンの時間を延ばしてみました。

全体を見たいので、割るとしても臓器をlostしたくないので…

横隔膜で切断した際に、腹腔内の状態は問題ありませんでしたか?

(無題) 削除/引用
No.2590-4 - 2010/05/20 (木) 15:08:21 - 千
当方でE18.5のパラフィンブロックを作成する場合、たいてい見たい部分に合わせてトリミングしています。

脳ならば首の部分でカット、腹部ならば横隔膜の上あたりでカットしています。
その後

4%PFAで一晩固定
  ↓
軽く水洗して脱灰液(10%クエン酸Na,22.5%ギ酸)に一晩
  ↓
再び軽く水洗後、エタノール、キシレンをへてパラフィン包埋

という感じです。

差し支えないようなら観察部位に合わせてトリミングするか、固定時間を長くしてみるといいかもしれません。
脳を観察しないなら、頭蓋骨に穴を空けるのもありだと思います。


脱灰のみならず、エタノールでの脱水が不十分な場合も、切片がボロボロになって薄切しにくくなります。

どのようなプロトコールでパラフィン包埋していますか?

(無題) 削除/引用
No.2590-3 - 2010/05/19 (水) 17:32:45 - andy
>[Re:2] 千さんは書きました :
> 脱灰はされましたか?
>
> E16あたりからは、脱灰なしでは薄切できませんよ?

早速ありがとうございます!!

脱灰は致しました。したのですが、うまくいかない事を先輩に相談すると、サンプルに穴を開けるか割るかしてみたら?と言われました。
サンプルを割るという事に抵抗がありまして…

(無題) 削除/引用
No.2590-2 - 2010/05/19 (水) 17:18:22 - 千
脱灰はされましたか?

E16あたりからは、脱灰なしでは薄切できませんよ?

組織固定 削除/引用
No.2590-1 - 2010/05/19 (水) 16:30:20 - andy
以前E18.5の胎児をPFAで固定し、切片を作成しようとしたのですが、骨がうまく切ることができませんでした。
たぶんうまく固定されていなかったためだと思うのですが、ボロボロになってしまいました。
そこで質問です。
聞いた話なのですが、E18.5の胎児をPFAに入れて固定する際に、頭がどこかに小さな穴を開けるとPFAが浸透しやすいというのは本当なのでしょうか?
また、胎児を二つに割って浸透しやすくするという事も聞いたのですが、その場合臓器がバラバラになってしまったり、変性してしまわないのでしょうか?よろしくお願いします。

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