当方でE18.5のパラフィンブロックを作成する場合、たいてい見たい部分に合わせてトリミングしています。
脳ならば首の部分でカット、腹部ならば横隔膜の上あたりでカットしています。
その後
4%PFAで一晩固定
↓
軽く水洗して脱灰液(10%クエン酸Na,22.5%ギ酸)に一晩
↓
再び軽く水洗後、エタノール、キシレンをへてパラフィン包埋
という感じです。
差し支えないようなら観察部位に合わせてトリミングするか、固定時間を長くしてみるといいかもしれません。
脳を観察しないなら、頭蓋骨に穴を空けるのもありだと思います。
脱灰のみならず、エタノールでの脱水が不十分な場合も、切片がボロボロになって薄切しにくくなります。
どのようなプロトコールでパラフィン包埋していますか? |
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