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二重染色時の抗原賦活化について トピック削除
No.259-TOPIC - 2009/04/01 (水) 06:31:19 - やまもと
いつもお世話になっております。
二重染色をする際、二番目の抗体のみ賦活化を行ないたい場合、一番目の蛍光染色（TSA kit 使用）に影響はないものでしょうか？経験のある方のご意見をお願い致します。
　
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(無題) 削除/引用
No.259-4 - 2009/04/01 (水) 08:38:03 - CJ
大昔に固定を忘れて処理（オートクレーブ１２０度２０分）したところ
１回目の染色の色素はまったくなくなってしまった（オートクレーブ前に染色があることは確認済み）、という経験があります。

(無題) 削除/引用
No.259-3 - 2009/04/01 (水) 08:17:44 - やまもと
CJさん、いつもお世話になっています。
なるほど、固定すればいいのですね。

ちなみにもし固定しなかった場合は、一部の二次抗体の結合が離れて、シグナルを失うことになるのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.259-2 - 2009/04/01 (水) 07:45:41 - CJ
加熱によって抗体が解離します。
これを防ぐために架橋をすればよいでしょう。具体的には
煮る前に４％ＰＦＡ/ＰＢで２０分間固定すればよいです。蛍光色素自体は加熱の影響を受けないように見えます。

二重染色時の抗原賦活化について 削除/引用
No.259-1 - 2009/04/01 (水) 06:31:19 - やまもと
いつもお世話になっております。
二重染色をする際、二番目の抗体のみ賦活化を行ないたい場合、一番目の蛍光染色（TSA kit 使用）に影響はないものでしょうか？経験のある方のご意見をお願い致します。
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