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(無題) 削除/引用 No.2567-3 - 2010/05/17 (月) 18:51:51 - 小鳥遊 > 「30日程度で植えつ」ぐというのは、コロニーの生えたプレートを4℃に保存しておいて、30日経ったらそこから同じ組成のプレートにストリークし、30℃でインキュベートしてコロニーが出たら、それをまた4℃に30日間保存するということを繰り返したということでしょうか。 はい、そういうことです。 > だとしたら、vectorが抜けるとかなんとかいう以前に、プレート上で酵母が死んでるんですよ。一般論として、合成培地のプレートに形質転換体の酵母を取っておいて問題無いのは、長くても2週間、できれば1週間以内でしょうね。 そんなに短いんですか・・・勉強不足でした。 > なるべく早い段階でグリセロールストックを作成し、以後は毎回そのストックから新たにプレートに引き直すのが望ましいです。 なるほど、グリセロールストックにしないといけないんですね。 ありがとうございました。 担当教授に方法を尋ねてみます。

(無題) 削除/引用 No.2567-2 - 2010/05/17 (月) 15:32:19 - 弘法 「30日程度で植えつ」ぐというのは、コロニーの生えたプレートを4℃に保存しておいて、30日経ったらそこから同じ組成のプレートにストリークし、30℃でインキュベートしてコロニーが出たら、それをまた4℃に30日間保存するということを繰り返したということでしょうか。 だとしたら、vectorが抜けるとかなんとかいう以前に、プレート上で酵母が死んでるんですよ。一般論として、合成培地のプレートに形質転換体の酵母を取っておいて問題無いのは、長くても2週間、できれば1週間以内でしょうね。 なるべく早い段階でグリセロールストックを作成し、以後は毎回そのストックから新たにプレートに引き直すのが望ましいです。

YTHで出た酵母の保存期間 削除/引用 No.2567-1 - 2010/05/17 (月) 14:12:41 - 小鳥遊 　初めまして、自分でもよく分からなくなってきたのでどなたかお答えください。お願いします。 　あるサンプルに対してYTHを行い、そのサンプルと相互作用する遺伝子を含んだ酵母をシークエンス等で見つけました。相互作用すると-his/-trp/-leu/-adeプレートで酵母が確認できるようになっています。 　その遺伝子を含んだ酵母を保存したいので、同じ-his/-trp/-leu/-adeのプレートに播き、30日程度で植えついでいたのですが、半年程度たった頃からコロニーが生えなくなりました。 　やはり、酵母からvecterが抜けて選抜が掛からなくなったのでしょうか？

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