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5kbのDNA産物を一気にシークエンスできますか? トピック削除
No.2550-TOPIC - 2010/05/14 (金) 15:36:26 - amuro
sequenceしたいDNA配列の5'末端と、3'末端は特異的な配列なのですが、
中の約5kb位が、同じ配列の繰り返しであるDNA配列の
シークエンスをしたいのですが、
中が同じ配列であるため、特異的な配列のプライマーの設計が不可能で、
5'末端もしくは3'末端で設計した特異的プライマーを用いて、
一気に5kbをシークエンスする方法・機械はないのでしょうか?
尚、既に、MGIでB6マウスの配列情報は載っています。
受託サービスで外注しても問題ありません。
しかし、あまり高額であると難しいかもしれませんが。
 
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お礼 削除/引用
No.2550-3 - 2010/05/15 (土) 08:31:21 - amuro
 ザンギさん、お返事頂きありがとうございます。
ザンギさんが、紹介して頂いた方法は、
切断して地道に読んでいく方法と理解してよろしいでしょうか。
やはり、この方法しかないでしょうか。
いくら、シークエンス装置が発達してきたとはいえ、
5kbを一気に読むのは困難でしょうか。

(無題) 削除/引用
No.2550-2 - 2010/05/14 (金) 16:49:17 - ザンギ
「同じ配列」がどれくらい同じかわかりませんが、

プラスミドに乗ってるんなら、Mung been nuclease等でdeletion clone を沢山作って、各クローンの削れ残った端っこだけ配列解析するんでしょうね。

作製した各クローンの断片長をアガロースゲル電気泳動等で正確に測定できれば、全く同じ繰り返し配列でも理論上はContigにできるはずです。

5kbのDNA産物を一気にシークエンスできますか? 削除/引用
No.2550-1 - 2010/05/14 (金) 15:36:26 - amuro
sequenceしたいDNA配列の5'末端と、3'末端は特異的な配列なのですが、
中の約5kb位が、同じ配列の繰り返しであるDNA配列の
シークエンスをしたいのですが、
中が同じ配列であるため、特異的な配列のプライマーの設計が不可能で、
5'末端もしくは3'末端で設計した特異的プライマーを用いて、
一気に5kbをシークエンスする方法・機械はないのでしょうか?
尚、既に、MGIでB6マウスの配列情報は載っています。
受託サービスで外注しても問題ありません。
しかし、あまり高額であると難しいかもしれませんが。

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