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(無題) 削除/引用 No.2533-3 - 2010/05/13 (木) 11:32:51 - dak to 通りすがりん。さん 丁寧な回答ありがとうございます。 確かにむやみにRIPAを使うのもナンセンスですね。 参考にさせていただきます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2533-2 - 2010/05/12 (水) 21:27:10 - 通りすがりん。 一般的なウエスタンと差はありません。 私は1% NP-40 Lysis Buffer,４℃でペレットをピペッティングし30分,４℃でインキュベート（途中数回ボルテックス）→遠心→等量の２×SDS sample Befferで調整しています。（最終的に50μg/レーンで泳動） 核タンパクをみる必要がない場合、核はなるべく壊さず、遠心で除去してしまいます。核内タンパクも溶かして検出したい場合はRIPAを使います。 抗体はNB600-1384です。

オートファジー　ＬＣ３ 削除/引用 No.2533-1 - 2010/05/12 (水) 15:15:58 - dak 初めまして。 いつも勉強させていただいております。 さて、この度オートファジーの研究をスタートしようと思っています。 細胞の系で、オートファジーに対する影響を検討するつもりです。 そこでＬＣ３のウエスタンをしようと思っているのですが、 皆さんはサンプルはどのように調整されていますか？ 普通に細胞全体をRIPAなどで可溶化させて、ソニック、遠心という流れで良いのでしょうか？ 論文では様々な調整方法を見つけたので、もし使い分け等あるならばアドバイスを頂けますでしょうか？ よろしくお願いします。

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