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Refoldingのやり方 トピック削除
No.2525-TOPIC - 2010/05/10 (月) 19:46:47 - R
こんにちは。
タンパク精製初心者なのです。

Hisタグタンパクをグアニジンで変性させた後、Refoldingがうまくいかずつまづいています。
 希釈法でRefoldingしたいのですが、みなさんどのようなプロトコールでやっていますか?

Refolding バッファーは必ずdegasさせて用いるものなのでしょうか?させなくてもうまくいきますか?

 Refoldingバッファーの中へサンプルを滴下する方法でやっているのですがうまくいかないので、今度は逆にサンプルの中にバッファーを滴下してみようかと思っています。
 しかし大量のバッファーを数時間の間マニュアルで(自分の手で)滴下していくのは無謀なのでどうしたらよいか困っています。
 市販でautomaticに滴下してくれるような装置ってあるのでしょうか?

 どんなプロトコールでもいいので教えていただければうれしいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.2525-3 - 2010/05/12 (水) 09:59:13 - 滴下?
流路を絞れば自然と溶液あるいは水自体の粘性で滴下できますよ。静脈点滴注射をイメージすれば良いかと思います。速度を厳密にコントロールしたければ、ペリスタティックポンプ、シリンジポンプなどの機器もあります。

なお、サンプルを徐々に別のバッファに置換するには普通透析処理します。

(無題) 削除/引用
No.2525-2 - 2010/05/11 (火) 10:24:08 - さく
リフォールディングは、あっさりうまくいく方がまれだと思います。
扱っているタンパク質をリフォールディングしている文献があれば、それを参考にするのがまず最初でしょう。うまくいかなければ、そこに問い合わせした方が確実です。
以前やったのは、バッファーにサンプルを滴下で入れてその後静置でした。バッファーが大量なので脱気したことはなかったです。

バッファー組成や巻き戻し方法など、タンパク質の数だけリフォールディングの方法があります。コレやれば大抵大丈夫みたいなプロトコールは無いです。以前ここで、リフォールディングのデータベースが紹介されていました。http://refold.med.monash.edu.au/

Refoldingのやり方 削除/引用
No.2525-1 - 2010/05/10 (月) 19:46:47 - R
こんにちは。
タンパク精製初心者なのです。

Hisタグタンパクをグアニジンで変性させた後、Refoldingがうまくいかずつまづいています。
 希釈法でRefoldingしたいのですが、みなさんどのようなプロトコールでやっていますか?

Refolding バッファーは必ずdegasさせて用いるものなのでしょうか?させなくてもうまくいきますか?

 Refoldingバッファーの中へサンプルを滴下する方法でやっているのですがうまくいかないので、今度は逆にサンプルの中にバッファーを滴下してみようかと思っています。
 しかし大量のバッファーを数時間の間マニュアルで(自分の手で)滴下していくのは無謀なのでどうしたらよいか困っています。
 市販でautomaticに滴下してくれるような装置ってあるのでしょうか?

 どんなプロトコールでもいいので教えていただければうれしいです。

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