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(無題) 削除/引用 No.2517-4 - 2010/05/08 (土) 19:16:59 - 中年 FLAGペプチドで溶出すれば、担体への非特異的吸着についてはかなりの部分解決すると思います。

(無題) 削除/引用 No.2517-3 - 2010/05/08 (土) 18:43:35 - 免沈 ご指摘の通りです。　記載不足で知りたい点が不明瞭でした。 セファロースや樹脂ビーズ、ダイナルその他のマグネティックビーズ、どちらでもかまわないので、、非特異吸着が低い担体を教えてもらえませんか？ ダイナルが良いと聞いたことがありますが、なんでも構いません。 バッファーに関しては高い塩濃度やでタージェンとの種類を振るべきですが、相互作用が弱い、相互作用している量が少ないことが別の実験でわかっているので、まだ検討中です。 担体に関して教えてもらえたら助かります。

(無題) 削除/引用 No.2517-2 - 2010/05/08 (土) 17:40:10 - み どれほどの熟練者なのか不明ですが、御自身が行われたプロトコールを何も記載されずに投稿されているのをみる限り、 実験条件とくにbuffer組成などの検討をすべきだと感じました。

抗FLAG抗体ビーズ 削除/引用 No.2517-1 - 2010/05/08 (土) 17:02:12 - 免沈 Flag融合タンパクとGFP融合タンパク質を培養細胞に発現させて、抗FLAG抗体ビーズで免沈し、GFPとFLAGのウエスタンブロッティングで結合を調べています。 GFP融合タンパク質（共沈される方）が膜タンパク質のためか、BSAでのプロッキングとプレクリアした後でもビーズへの非特異的吸着がひどくて困っています。 シグマのEZ-view M2抗FLAGビーズを使っていますが、ほかに人食い吸着を下げる良い方法が有ったら教えてください。 Dynalのエポキシ、トシルにM2抗FLAG抗体を直接結合させようかとも思っているのですが。。。

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