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膜タンパクのウエスタン用サンプル調整法について トピック削除
No.2516-TOPIC - 2010/05/08 (土) 15:57:18 - ハチ


現在、ミトコンドリアの膜タンパク(一回貫通)についての実験を行っているのですが、ウエスタン用のサンプル調整法について困っています。

現在では、transfectionした細胞をソニケーションして調整しています。
膜タンパク故に、ちゃんと破砕できているか不安です。

皆様はどのようにサンプルを調整していますか?
どなたか助言をお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.2516-3 - 2010/05/08 (土) 18:48:53 - キアゲン
細胞が接着しているプレートに電気泳動のサンプルバッファーを直接加えてます。
浮遊している細胞は遠心してペレットに直接加えてます。

簡単で普通の方法だと思いますけど、これではバンドが出ませんか?

実験目的が不明 削除/引用
No.2516-2 - 2010/05/08 (土) 17:52:19 - ats
どのように困っているのでしょうか?実験目的が不明で答えられないと思います。
transfectした遺伝子産物が、他の細胞内小器官や細胞質ではなくミトコンドリア膜に局在していることをwestern blotで確かめたいのでしょうか??

膜タンパクのウエスタン用サンプル調整法について 削除/引用
No.2516-1 - 2010/05/08 (土) 15:57:18 - ハチ


現在、ミトコンドリアの膜タンパク(一回貫通)についての実験を行っているのですが、ウエスタン用のサンプル調整法について困っています。

現在では、transfectionした細胞をソニケーションして調整しています。
膜タンパク故に、ちゃんと破砕できているか不安です。

皆様はどのようにサンプルを調整していますか?
どなたか助言をお願い致します。

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