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(無題) 削除/引用 No.2499-3 - 2010/05/06 (木) 10:51:46 - ATG 　＞あべちゃんさん 　コメントありがとうございます。 　プラスミドの精製というのはＰＣＲ productsのことでしょうか。 　この精製に関しましては、アガロース電気泳動の後、切り出した後、通常のエタ沈で濃縮しております。塩濃度に関しましてはどれくらい残っているのかは分かりません。次からは70%エタノールで２回洗うことにしてみます。 　ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2499-2 - 2010/05/04 (火) 19:13:27 - あべちゃん >[Re:1] ATGさんは書きました : > 　�@だいたい皆さんはどれくらいのrecombination効率でBACのサブクローニングに成功されていますか？ > 　�ApRed/ET vectorのelectroporationの後、プレートを保存できないという噂を聞いたのですが、本当でしょうか。 > 　�Bうまくいかなかったとき、どこを改善すればうまくいきましたか？ レスが付かないようなので、余り経験無いのですが、 5kb程度のプロモーターをクローニングするくらいしか、経験有りませんが特に問題なかったです。１／８くらいの確率だったと思います。 ポジコンでは上手くいっているようなので、大腸菌の洗いやアラビノースによる誘導など全般は上手くいっているのでしょうね。配列も問題ないとすれば、 受け手プラスミドの精製度はどうでしょう？エレポのときって、塩などの夾雑物を嫌いますよね。 それくらいしか思い浮かびませんでした。

Red/ET Recombination System BAC SUBCLONING Kitについて 削除/引用 No.2499-1 - 2010/05/03 (月) 13:37:58 - ATG 　Gene bridge社からでているRed/ET Recombination System BAC SUBCLONING Kitを使用されたことのある方、是非教えてください。 　現在、このキットを用いてtargeting vectorを作成しようとしているのですが、うまくいきません。キットについているpositive controlでは30％の確率でrecombinationされるのに、私の目的のBACは何度やってもrecombinationされませんでした。primerも何度も確かめ、テクニカルサポートセンターとのやりとりで間違っていなさそうなのですが、どこかおかしいのかもしれません。 　実際に、私のやる方法ではPCR productのエレクトロポレーション後にコロニーがあまり生えないので、少しおかしいのかなと思っております。 　そこで情報をいただきたいのは、 　�@だいたい皆さんはどれくらいのrecombination効率でBACのサブクローニングに成功されていますか？ 　�ApRed/ET vectorのelectroporationの後、プレートを保存できないという噂を聞いたのですが、本当でしょうか。 　�Bうまくいかなかったとき、どこを改善すればうまくいきましたか？ 　何卒よろしくお願いいたします!!

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